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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求PCR解！谢谢！
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wzc4884

金虫 (正式写手)

[求助] 求PCR解！谢谢！

大家好，求解PCR，希望大家指点一下。附件是我今天做的PCR结果。泳道14是阴性PCR对照即模板是2微升二次水，泳道11、12是阳性PCR结果，泳道2至10是待检验的菌液，（其中菌液是从构建的重组质粒中转化BL21DE3后，挑取单克隆摇起的菌液，直接加2微升菌液进行的PCR）。请大家帮助分析下，是否是阳性结果呢？还是根本就是假阳性的单克隆呢？谢谢了！
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1楼 2011-04-28 15:50:14
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
1949stone(金币+2): 最喜欢交流 2011-04-28 19:05:00
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-28 16:52:45:
我觉得验证这种重组质粒最好先快检一下然后再提质粒酶切，没必要直接PCR。
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，取上清跑胶，对照上个空载体，就是没有连片段前的质粒（环合的哈 ...

快检？
我们实验室从没有提起过。。。这个方法是不是很迅速呢？
就是按照您所说的来做吗？取上清一般多少跑胶呢？出来条带又怎样呢？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
12楼2011-04-28 18:00:47
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-28 19:03:10
1有可能是对的，其他的大小和你阳性有差别，建议1提质粒酶切验证
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在等待中涅槃重生
2楼2011-04-28 16:16:01
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wzc4884(金币+1): 谢谢！ 2011-04-28 16:35:36
说错了，是第二道可能是对的
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在等待中涅槃重生
3楼2011-04-28 16:16:38
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by wzc4884 at 2011-04-28 15:50:14:
大家好，求解PCR，希望大家指点一下。附件是我今天做的PCR结果。泳道14是阴性PCR对照即模板是2微升二次水，泳道11、12是阳性PCR结果，泳道2至10是待检验的菌液，（其中菌液是从构建的重组质粒中转化BL21DE3后，挑 ...

我也举得泳道2（maker右边第一个）是对的。可以提质粒，跟载体一起跑胶，跑久点，如果是重组质粒，会比载体跑得慢，从胶上可以看出来。之后再酶切最后验证。
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4楼2011-04-28 16:19:13
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