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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求PCR解！谢谢！
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wzc4884

金虫 (正式写手)

[求助] 求PCR解！谢谢！

大家好，求解PCR，希望大家指点一下。附件是我今天做的PCR结果。泳道14是阴性PCR对照即模板是2微升二次水，泳道11、12是阳性PCR结果，泳道2至10是待检验的菌液，（其中菌液是从构建的重组质粒中转化BL21DE3后，挑取单克隆摇起的菌液，直接加2微升菌液进行的PCR）。请大家帮助分析下，是否是阳性结果呢？还是根本就是假阳性的单克隆呢？谢谢了！
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1楼 2011-04-28 15:50:14
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wzc4884

金虫 (正式写手)
正如您所说，提取质粒后跑胶，附件是我提取质粒后的跑胶结果，泳道1、2是从BL中提取的质粒、泳道3是空质粒，泳道4是之前已经证明正确的重组质粒。从胶中看到从BL中提取的重组质粒要比空质粒慢些，能初步说明构建成功了吗？但是感觉泳道1
、2与之前构建的质粒也不是完全一样。看来，我应该听您的，试着酶切再验证下，先不进行PCR了。但是我还有个问题，PCR为什么会假阳性较多呢？我之前一直以为PCR的准确性反而最好，小女才疏学浅，希望指点迷津，谢谢了！
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11楼2011-04-28 17:45:36
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-28 19:03:10
1有可能是对的，其他的大小和你阳性有差别，建议1提质粒酶切验证
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在等待中涅槃重生
2楼2011-04-28 16:16:01
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wzc4884(金币+1): 谢谢！ 2011-04-28 16:35:36
说错了，是第二道可能是对的
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在等待中涅槃重生
3楼2011-04-28 16:16:38
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by wzc4884 at 2011-04-28 15:50:14:
大家好，求解PCR，希望大家指点一下。附件是我今天做的PCR结果。泳道14是阴性PCR对照即模板是2微升二次水，泳道11、12是阳性PCR结果，泳道2至10是待检验的菌液，（其中菌液是从构建的重组质粒中转化BL21DE3后，挑 ...

我也举得泳道2（maker右边第一个）是对的。可以提质粒，跟载体一起跑胶，跑久点，如果是重组质粒，会比载体跑得慢，从胶上可以看出来。之后再酶切最后验证。
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4楼2011-04-28 16:19:13
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