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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定PCR试验的最优体系
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hhb7610076

金虫 (正式写手)

[求助] 如何确定PCR试验的最优体系

做蚜虫的SSR-PCR，琼脂糖检测后只有引物二聚体，如何改进pcr体系呢？
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不能承受生命之轻！
1楼 2011-04-27 09:02:36
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ybQuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

原因：
1.引物特异性差
2.模板或引物浓度过高
3.酶量过多
4.Mg2+浓度偏高
5.退火温度偏低
6.循环次数过多
对策：
1.重新设计引物或者使用巢式PCR
2.适当降低模板或引物浓度
3.适当减少酶量
4.降低镁离子浓度
5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法
6.减少循环次数
ps：做一下引物浓度梯度、TM梯度等。
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哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
5楼2011-04-29 09:40:58
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 是啊 2011-04-27 16:56:01
有了条带才去优化体系的，现在是没条带，先增加模板用量，降低退火温度，等有了条带再去优化。
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2楼2011-04-27 10:06:21
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liugs

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-04-28 08:42:19
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ybQuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

hhb7610076(金币+2): 2011-05-06 10:32:19
原因：
1.引物特异性差
2.模板或引物浓度过高
3.酶量过多
4.Mg2+浓度偏高
5.退火温度偏低
6.循环次数过多
对策：
1.重新设计引物或者使用巢式PCR
2.适当降低模板或引物浓度
3.适当减少酶量
4.降低镁离子浓度
5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法
6.减少循环次数
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哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
4楼2011-04-29 09:39:43
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