| 查看: 1992 | 回复: 6 | ||
| 本帖产生 3 个 PhEPI ，点击这里进行查看 | ||
xiajing_acm新虫 (小有名气)
|
[求助]
关于MTT加液与弃液的一些思考与疑问
|
|
|
给位大侠： 你们好，小弟要着手MTT，里面有些问题不太清楚，请给位指点： 1、种板时我每孔打算加100μl 共5000个左右细胞，等细胞贴壁后需不需要把培养液吸出之后再加入100μl 的药液呢？我看有的资料上说直接加入100μl药液维持到200μl的体系，可是我是按照100μl体系来算的加药量啊，如果不吸走里面原有的100μl培养液的话，那我的药物浓度岂不被稀释了一倍吗？ 2、加药处理适当时间后，在加MTT需不需要把里面的培养液吸出来呢？若吸出来的话，那么是直接加入20μl 的5mg/ml的MTT呢，还是需要加入180μl新鲜的培养液+20μl 5mg/ml的MTT呢？是用含血清的培养基还是不含血清的？ 3、加DMSO之前需要吸走培养液吧？给位战友是怎么操作才能保证不把甲瓒结晶吸走呢？需要在平板离心机上离心吗？ 4、上酶标仪检测波长到底选择多少合适呢？490还是570nm呢？还需要设630nm参比波长吗？参比波长作用是什么呢？怎么用它的数据呢？ 非常感谢各位大侠，盼早日解决！祝各位一切顺利！ |
回复此楼» 猜你喜欢
272分材料子求调剂
已经有36人回复
-
275求调剂
已经有8人回复
-
调剂求收留
已经有5人回复
-
一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂
已经有20人回复
-
070300化学学硕311分求调剂
已经有19人回复
-
材料与化工调剂
已经有13人回复
-
材料与化工调剂
已经有33人回复
-
复试调剂
已经有7人回复
-
一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂
已经有17人回复
-
还有化工二轮调剂的学校吗
已经有47人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助液相测定β-胡萝卜素的保留时间问题
已经有15人回复
- 中药提取液如何简单、彻底去除鞣质？？~~~
已经有11人回复
- 关于离子液体走高校液相色谱的问题？
已经有5人回复
- 液相柱子填充 仪器
已经有4人回复
- 乳化液破乳，破乳量如何确定
已经有6人回复
- 对英文论文的写法的一些感触
已经有17人回复
- 关于邻苯二甲酸酐（苯酐）在液相分析中的疑问！！！
已经有5人回复
- Discover dyanimics 模拟醇的水溶液时的氢键能为什么总是零？
已经有7人回复
- 制备液相峰形问题
已经有4人回复
- 涂料的后增稠和乳液有多大的关系？
已经有5人回复
- 硫酸铈标准滴定液的配制和标定的一些疑问
已经有7人回复
- 【求助/交流】大量发酵前种子液的培养
已经有5人回复
- 【资源】一些常用药品的自制或回收.doc
已经有11人回复
吖漾
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1168.4
- 红花: 1
- 帖子: 267
- 在线: 59.5小时
- 虫号: 1144628
- 注册: 2010-11-12
- 性别: MM
- 专业: 抗肿瘤药物药理
2楼2011-04-22 09:08:50
010.zilong
银虫 (初入文坛)
- PhEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 299.8
- 帖子: 26
- 在线: 5.9小时
- 虫号: 690175
- 注册: 2009-01-08
- 性别: MM
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★
karl2100(金币+1): 谢谢回帖！ 2011-04-24 19:07:52
xiajing_acm(金币+5): 2011-04-27 19:42:28
qinhy(EPI+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-05-01 08:01:45
karl2100(金币+1): 谢谢回帖！ 2011-04-24 19:07:52
xiajing_acm(金币+5): 2011-04-27 19:42:28
qinhy(EPI+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-05-01 08:01:45
|
1.这个主要看你的药物性质以及培养时间,因为在培养基中存在的血清,成分复杂,有时会干扰MTT结果,所以需要吸出原培养液后再给药,但也有一种可能,即培养时间比较长,细胞个数大则会把培养液中所含有的血清消耗掉,这样就不用换液了,对于后半个问题,你加倍浓度不就OK了吗? 2.如果细胞帖的紧,一般来说要把原液吸出去,否则MTT会与一些药物形成二聚体影响结果.用不含血清的培养基采用后一种办法加入. 3.这个是肯定得吸走的啊,我做过SY5Y,直接把板子倒过来,扣去液体即可.没试过离心,但原理上应该可以. 4.不需要参比波长,490-570都行,看你的颜色深浅而定 仅供参考嘿嘿 |
3楼2011-04-22 14:21:57
xiajing_acm
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11.5
- 散金: 45
- 帖子: 86
- 在线: 35.9小时
- 虫号: 922931
- 注册: 2009-12-08
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2011-04-22 15:07:37
wenzhiren
木虫 (小有名气)
- PhEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2370.8
- 散金: 10
- 帖子: 65
- 在线: 85.3小时
- 虫号: 118467
- 注册: 2005-11-27
- 性别: GG
- 专业: 生物材料
5楼2011-04-22 15:47:07
Chlo_Q
木虫 (著名写手)
- PhEPI: 1
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 1385.6
- 散金: 1304
- 红花: 23
- 帖子: 2738
- 在线: 306.6小时
- 虫号: 971183
- 注册: 2010-03-14
- 性别: GG
- 专业: 睡眠与睡眠障碍
【答案】应助回帖
★
karl2100(金币+1): 谢谢您的回复！ 2011-04-24 19:08:12
xiajing_acm(金币+5): 2011-04-27 19:42:39
qinhy(EPI+1): 2011-05-01 08:02:06
karl2100(金币+1): 谢谢您的回复！ 2011-04-24 19:08:12
xiajing_acm(金币+5): 2011-04-27 19:42:39
qinhy(EPI+1): 2011-05-01 08:02:06
|
首先，我也考虑过这个问题1，最后的解决方案是将药物配成100倍液，加的时候我就直接往100里加1微升了。主要考虑的不是药的浓度问题，因为这要确定好之后才好配的，而是控制变量的问题，体积大了，细胞的环境就不同了。。。 2.MTT的原理你有没有了解，它是靠活细胞的酶反应，我认为，不要饿着它了，原来是什么培养液就继续用那个，如果不是培养了太久，就直接加MTT了（除非，你的药物具有还原性！！） 3.论坛里有一帖，很详细的讲了MTT法，里面有，建议搜一下看看，我看了很受用 4.我用着的是570测定，630参比。没方法，还是贴个链接你吧，http://www.biomart.cn/experiment/430/488/498/17544_1.htm 其他论坛上的，说法有多种，仅供参考 |
6楼2011-04-24 11:06:19
7楼2011-08-20 14:04:34
