应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 关于MTT加液与弃液的一些思考与疑问
31/1返回列表
查看: 1722  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 3 个 PhEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

010.zilong

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢回帖！ 2011-04-24 19:07:52
xiajing_acm(金币+5): 2011-04-27 19:42:28
qinhy(EPI+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-05-01 08:01:45
1.这个主要看你的药物性质以及培养时间,因为在培养基中存在的血清,成分复杂,有时会干扰MTT结果,所以需要吸出原培养液后再给药,但也有一种可能,即培养时间比较长,细胞个数大则会把培养液中所含有的血清消耗掉,这样就不用换液了,对于后半个问题,你加倍浓度不就OK了吗?
2.如果细胞帖的紧,一般来说要把原液吸出去,否则MTT会与一些药物形成二聚体影响结果.用不含血清的培养基采用后一种办法加入.
3.这个是肯定得吸走的啊,我做过SY5Y,直接把板子倒过来,扣去液体即可.没试过离心,但原理上应该可以.
4.不需要参比波长,490-570都行,看你的颜色深浅而定
仅供参考嘿嘿
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-04-22 14:21:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

wenzhiren

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qinhy(EPI+1): 2011-05-01 08:01:56
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2011-04-21 16:50:25:
给位大侠：

你们好，小弟要着手MTT，里面有些问题不太清楚，请给位指点：

1、种板时我每孔打算加100μl 共5000个左右细胞，等细胞贴壁后需不需要把培养液吸出之后再加入100μl

的药液呢？我看有的资料上 ...

1、你可以吸出50，再加入50ul新的培养基，其中药物浓度翻倍。
2、一般不用吸出原来的培养基，直接加入10ulMTT即可。
3、这个问题要看细胞贴壁牢固程度了，想前面那位大侠，细胞贴壁牢固，直接把板反过来，下面垫无菌吸纸，培养基就会被自动吸走；如果细胞贴壁不牢固，那你就要考虑把板倾斜了，把其中的培养基轻轻吸出来，但是要注意，tips头部不要碰到板的地步，否则会吧细胞粘下来。还有些悬浮细胞MTT时，直接往里面加入裂解液了，也是可以把甲瓒溶解的。
4，一般选择490nm波长。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-04-22 15:47:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Chlo_Q

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢您的回复！ 2011-04-24 19:08:12
xiajing_acm(金币+5): 2011-04-27 19:42:39
qinhy(EPI+1): 2011-05-01 08:02:06
首先，我也考虑过这个问题1，最后的解决方案是将药物配成100倍液，加的时候我就直接往100里加1微升了。主要考虑的不是药的浓度问题，因为这要确定好之后才好配的，而是控制变量的问题，体积大了，细胞的环境就不同了。。。
2.MTT的原理你有没有了解，它是靠活细胞的酶反应，我认为，不要饿着它了，原来是什么培养液就继续用那个，如果不是培养了太久，就直接加MTT了（除非，你的药物具有还原性！！）
3.论坛里有一帖，很详细的讲了MTT法，里面有，建议搜一下看看，我看了很受用
4.我用着的是570测定，630参比。没方法，还是贴个链接你吧，http://www.biomart.cn/experiment/430/488/498/17544_1.htm
其他论坛上的，说法有多种，仅供参考
赞一下(3人) 回复此楼
你的理想是什么？你能为你的理想做什么？为了你的理想你能放弃什么？
6楼2011-04-24 11:06:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiajing_acm 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭