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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物纯培养问题
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rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-20 18:08:14
一、稀释倒平板法（倾注平板法）
先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

二、涂布平板法
    首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃涂棒把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。

我觉得涂布平板法比稀释倒平板法更方便些，工作量要少点。而且在稀释倒平板法（倾注平板法）中，细菌不易分散或长成菌落连在一起。

楼主可以参看沈萍、陈向东编写的第四版《微生物学实验》第28页至34页的内容。
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世界睡了，我醒着。。
4楼2011-04-20 17:12:09
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scelab(金币+9, EPI+1): very good 2011-04-21 00:20:52
最重要的区别一共有三点

1、稀释倒平板法一次倒平板数量较多，因为一瓶培养基有好几十毫升，或者上百，能倒6块直径9厘米的平板了。当然如果把培养基装到小的三角瓶里也行。就别把培养基装到试管里了，因为有些培养基经过两次灭菌之后成分可能有变化。或者配制培养基的时候把琼脂粉装到试管里，灭完菌之后要记得摇匀，要不然有可能管底的培养基凝固好了，上部分却是一抖就碎，不过没什么实质性影响。

稀释涂平板法随便涂板多少块都行，想涂少的时候，就比稀释倒平板法有优势。

2、稀释倒平板法由于部分微生物分布于培养基内部，缺乏气体，所以能分离得到兼性厌氧、好氧微生物和厌氧微生物，而稀释涂平板法由于微生物只能生长在表面，所以能分离得到兼性厌氧和好氧微生物，不能分离得到厌氧微生物。

3、稀释倒平板法由于有的细菌可能不耐热，而有时候每个人的经验有偏差，温度稍高的时候就把菌液加进去了，可能有微生物死亡。但稀释涂平板法没有这个顾虑。

做实验之前记清楚步骤很重要，但更重要的是分析方法之间的差别，明白选用某种方法涉及到的原因，思考很重要，要不然硕士博士就跟中专生技术工一样了。不针对谁，只是有感而发。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-20 at 23:11 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-04-20 22:55:06
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