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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 特定蛋白表达
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 牛，精辟 2011-04-20 10:55:15
已有功能基因序列好办，先分析该基因序列，设计PCR引物，PCR获得编码基因，连接到T载体测序证实；后面看你要表达在什么宿主了，连入特定的表达载体，如果要分离纯化的话可以考虑加入HIS-TAG纯化标签（有些载体上就带的），转化宿主细胞，筛选，诱导表达，然后分离纯化出功能蛋白。
以上是基本流程，具体方案还要涉及到你的基因情况、载体情况等等。
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2楼2011-04-20 10:53:04
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智能机器人

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beibei9535

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晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主
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dhd997(金币+6, EPI+1): 2011-04-20 13:48:53
2楼基本上是正解。但是楼主记得明白每部怎么选择。看您专业不是分子生物学，所以可能会需要学习的东西很多。
比如，为什么先连接T载体，后连接表达载体。2者什么区别。
第二，添加his标签，还是使用GST标签。这些看自己。
第三，宿主和载体的配套。Rosseta， BL21等等。
第四，诱导表达会遇见不少问题，比如诱导温度，时间，诱导剂浓度。
同时最麻烦的就是如果不可溶表达。面临着包涵体 的很多问题需要考虑。
基本上从上游到下游纯化出来，基本上要求不严格的话一个硕士可以毕业了。

[ Last edited by beibei9535 on 2011-4-20 at 13:02 ]
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
4楼2011-04-20 12:59:51
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