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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 特定蛋白表达 已有2人参与

我对某个功能蛋白感兴趣，利用分析手段纯化研究他的相关性质，
在gene bank上找到它的对应基因后，要克隆 表达等分子手段，恳请那位大哥大姐给条详细的技术路线，
已获知这个功能基因序列，及有全基因序列及提取产物，
以后该怎么办呢
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天天如此耶！！！
1楼 2011-04-19 18:19:59
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lxj341401

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 牛，精辟 2011-04-20 10:55:15
已有功能基因序列好办，先分析该基因序列，设计PCR引物，PCR获得编码基因，连接到T载体测序证实；后面看你要表达在什么宿主了，连入特定的表达载体，如果要分离纯化的话可以考虑加入HIS-TAG纯化标签（有些载体上就带的），转化宿主细胞，筛选，诱导表达，然后分离纯化出功能蛋白。
以上是基本流程，具体方案还要涉及到你的基因情况、载体情况等等。
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2楼2011-04-20 10:53:04
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响应面

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
谢谢 上楼的
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天天如此耶！！！
3楼2011-04-20 12:30:39
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beibei9535

新虫

晕晕小版主~ 姑娘你好！
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6, EPI+1): 2011-04-20 13:48:53
2楼基本上是正解。但是楼主记得明白每部怎么选择。看您专业不是分子生物学，所以可能会需要学习的东西很多。
比如，为什么先连接T载体，后连接表达载体。2者什么区别。
第二，添加his标签，还是使用GST标签。这些看自己。
第三，宿主和载体的配套。Rosseta， BL21等等。
第四，诱导表达会遇见不少问题，比如诱导温度，时间，诱导剂浓度。
同时最麻烦的就是如果不可溶表达。面临着包涵体 的很多问题需要考虑。
基本上从上游到下游纯化出来，基本上要求不严格的话一个硕士可以毕业了。

[ Last edited by beibei9535 on 2011-4-20 at 13:02 ]
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
4楼2011-04-20 12:59:51
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管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
呵呵 还是楼上高明 我是生物化工的 分子接触的相当相当少 只是实验用到了这一部分才想着学学
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天天如此耶！！！
5楼2011-04-21 10:55:10
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响应面

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
我的实验目的就是对功能酶学性质的研究，蛋白降解菌已筛选，DNA已提取，功能酶DAN片段（Jsa）也能从genebank查到
最后就是想得到Jsa的表达蛋白，研究其酶学性质
我写的的工科 这方面没怎么学过 见笑了
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天天如此耶！！！
6楼2011-04-21 11:02:25
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