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特定蛋白表达 已有2人参与
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我对某个功能蛋白感兴趣，利用分析手段纯化研究他的相关性质， 在gene bank上找到它的对应基因后，要克隆 表达等分子手段，恳请那位大哥大姐给条详细的技术路线， 已获知这个功能基因序列，及有全基因序列及提取产物， 以后该怎么办呢 |
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lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
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2楼2011-04-20 10:53:04
3楼2011-04-20 12:30:39
beibei9535
荣誉版主 (职业作家)
晕晕小版主~ 姑娘你好！
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dhd997(金币+6, EPI+1): 2011-04-20 13:48:53
dhd997(金币+6, EPI+1): 2011-04-20 13:48:53
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2楼基本上是正解。但是楼主记得明白每部怎么选择。看您专业不是分子生物学，所以可能会需要学习的东西很多。 比如，为什么先连接T载体，后连接表达载体。2者什么区别。 第二，添加his标签，还是使用GST标签。这些看自己。 第三，宿主和载体的配套。Rosseta， BL21等等。 第四，诱导表达会遇见不少问题，比如诱导温度，时间，诱导剂浓度。 同时最麻烦的就是如果不可溶表达。面临着包涵体 的很多问题需要考虑。 基本上从上游到下游纯化出来，基本上要求不严格的话一个硕士可以毕业了。 [ Last edited by beibei9535 on 2011-4-20 at 13:02 ] |
4楼2011-04-20 12:59:51
5楼2011-04-21 10:55:10
6楼2011-04-21 11:02:25
