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qPCR标准曲线制作
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| 想对某物种某基因的表达做相对定量，想用双标曲线法，请问这个标准曲线如何去做？是要提取某物种RNA反转得到cDNA后测定cDNA浓度再做不同梯度稀释么？我实验室刚开始做这个，很多事情都不清楚。谢谢各位了！ |
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4楼2016-11-25 16:39:07
12zhangwei
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 在线: 20.7小时
- 虫号: 777006
- 注册: 2009-05-22
- 专业: 生物化学
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西瓜(金币+3): 感谢分享哦 2011-07-23 16:58:01
西瓜(金币+3): 感谢分享哦 2011-07-23 16:58:01
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你好我也要做这个，也是不懂，现在还在理论学习，不过我找到一点资料，可以和你分享一下，希望对你有帮助。应用Real Time PCR进行mRNA表达量的相对定量分析 http://www.doc88.com/p-73342721466.html |
2楼2011-07-22 21:06:28
空谷幽风
金虫 (正式写手)
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- 应助: 13 (小学生)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★
西瓜(金币+1): 其实就是说标准曲线和样品用的是同一对引物吧。有很多实验只能用绝对定量呢，比如说需要知道确切的分子数目。单看表达量变化的话用相对定量就ok了。 2011-07-23 17:00:09
7788945(金币+1): 2011-08-03 15:36:45
7788945(金币+3): 2011-08-05 09:27:09
7788945(金币+3): 2011-08-19 20:10:54
西瓜(金币+1): 其实就是说标准曲线和样品用的是同一对引物吧。有很多实验只能用绝对定量呢，比如说需要知道确切的分子数目。单看表达量变化的话用相对定量就ok了。 2011-07-23 17:00:09
7788945(金币+1): 2011-08-03 15:36:45
7788945(金币+3): 2011-08-05 09:27:09
7788945(金币+3): 2011-08-19 20:10:54
| 做标准标准曲线的模板与你要定量的模板必须是扩的完全相同的一段序列，并且你做标准曲线的模板必须能够精确定量，比如几个拷贝数要能算出来，所以标准品的制备是比较难的一件事情，一般都是做相对定量而不会做绝对定量 |
3楼2011-07-22 21:16:45
