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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】透明圈大小和蛋白酶浓度的关系
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nancyyazi

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】透明圈大小和蛋白酶浓度的关系

我想做透明圈大小和蛋白酶浓度关系的标准曲线。我想求助具体的方法，是将不同浓度的蛋白酶滤纸片贴在酪蛋白培养基上，然后培养一段时间测量透明圈大小吗？
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1楼 2011-04-13 16:17:21
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mche2005

木虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-13 17:15:42
我做了近一年的纤维素酶产生菌筛选工作。主要是利用刚果红进行筛选。初筛是主要以H/D进行筛选，但是，这不准确，准确的掌握酶活，则需要进行发酵复筛。

水解圈可以从一定程度上反应菌落酶活性的大小。
但是，比水解圈更为准确的是水解圈直径/菌落直径的比值可以更好的指示蛋白酶酶活性的高低。
但是，这种关系，并不是非常精确的，如果真的要精确，需要进一步测定酶活。
虽然H/D不精确，但是，在大规模筛选或者工作量较大时，不失为一个有效的判断方法。

[ Last edited by mche2005 on 2011-4-13 at 17:41 ]
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3楼2011-04-13 16:32:08
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)
这个应该影响因素很多吧，培养基的量要严格控制相同吧！
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2楼2011-04-13 16:23:45
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
rainwander(金币+3, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-13 17:16:22
没必要纠缠在平板透明圈与酶活力高低的关系这个问题上，没有相关性的。我硕士论文上对这个问题有讨论，与蛋白酶产生菌的筛选道理是相通的。

4.2关于淀粉降解微生物的筛选方法

在菌种初筛时依据在含淀粉平板上产生降解圈来判断微生物是否产淀粉酶，一般认为H/D值高即产酶活力高，比值小就被淘汰。但本工作发现H/D值值的大小与产酶活力的高低之间并没有明显的相关性，有的H/D值虽然不大，但液体培养时酶活并不低。所以，淀粉酶产生菌产淀粉酶活力的高低应以多次液体培养摇瓶发酵测酶活的复筛验证为准。

个人推测H/D值的高低可能与以下因素有关：
①淀粉平板的厚薄：相对于同一个微生物来说，在培养条件相同的情况下，由于产酶量一定，故平板越厚H/D值越小，平板越薄H/D值越大；
②平板的形状：由于培养皿在生产过程中不可能做到完全一致，所以造成很多培养皿的底部不是完全平整的，甚至有较大变形，这样就会造成在同一块淀粉平板上培养基的厚薄不一致，引起系统误差；
③各种微生物所产淀粉酶在淀粉平板上的稳定性不一致，产胞外蛋白酶活力的高低也不一致。有的微生物所产淀粉酶比较稳定，就能在平板上存活较久，有利于形成较大的H/D值。或者有的微生物所产蛋白酶活力较低，对淀粉酶的降解作用较弱，这也有利于形成较大的H/D值。
产淀粉酶时间早晚不一致，早产酶则酶对淀粉的降解时间长，利于产生较大的降解圈。
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4楼2011-04-13 16:32:40
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mche2005

木虫 (正式写手)
★ ★
love_in_em(金币+2): 有道理 2011-04-13 23:09:37
产淀粉酶时间早晚不一致，早产酶则酶对淀粉的降解时间长，利于产生较大的降解圈。
产酶早，往往产酶时间短，既然时间短，那么，降解圈就不一定大了。

这里有一个菌种筛选的图书章节。牵涉到淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶的筛选

[ Last edited by mche2005 on 2011-4-13 at 20:13 ]
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5楼2011-04-13 17:37:28
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