应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白提取
51/1返回列表
查看: 1676  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tangchaoxi

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】蛋白提取

请问下酸会影响提细菌蛋白吗？因为我需要将培养基中的难溶磷用酸溶掉才能得到菌体。谢谢。另外，提出的蛋白可以直接双向电泳吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-12 11:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangchaoxi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2011-04-13 18:34:09:
绝对不可以。
浓盐酸会溶解细胞，1min 内就溶解了，然后大部分蛋白被酸沉。
酸，即使50 mM HCl，也会沉淀许多细胞蛋白。

我觉得你没必要非要这时候去除磷酸钙。
你可以在破碎菌体时离心去除 ...

不得不说你真的很厉害，分析的很详细！谢谢！现在问题是我找差异蛋白应该是提菌体蛋白，好像是将菌液离心，去上清，再用缓冲液重悬，然后直接硫酸铵沉淀蛋白，这过程中哪儿能去掉磷酸钙呢？还有，我那个菌产酸，培养一天后pH值就已经是3点几了，是不是已经不能提蛋白了？劳烦您再给说说，O(∩_∩)O谢谢
赞一下 回复此楼
6楼2011-04-13 20:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)
★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-12 21:45:46
tangchaoxi(金币+3): 2011-04-13 08:45:56
引用回帖:
Originally posted by tangchaoxi at 2011-04-12 11:18:00:
请问下酸会影响提细菌蛋白吗？因为我需要将培养基中的难溶磷用酸溶掉才能得到菌体。谢谢。另外，提出的蛋白可以直接双向电泳吗？

后面看到，你的蛋白是用来做双向电泳的，而不是测活的。
因此，低pH的酸应该影响不到蛋白吧。 关键是你加酸量有多少？
难道要加100 mM的HCl处理 一小时？
那菌体估计都要破掉了。


你的菌体的获得很麻烦吗？难道是生长在磷酸钙之类的上面？


菌体提取的蛋白，要分成几类：
1）最简单的，可溶性上清中的蛋白: 去除盐类后，可以做双向电泳的样品。

2）膜蛋白，因为可溶性差，需要特殊的试剂处理，增加其在第一维电泳时的可溶性。具体的你得去查论文，这里只是提示一下。

另外，实际上，对于全细胞蛋白，双向电泳许多时候会过滤掉很多蛋白点的！
选择双向电泳Loading buffer 组分很关键。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-12 17:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangchaoxi

新虫 (小有名气)
谢谢！培养基中是有磷酸钙，我就是要加酸把它给溶了，时间不长，溶了之后立即离心，用缓冲液洗洗可以吗？我是想提蛋白，双向电泳找差异蛋白。直接上双向找可以吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-13 08:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangchaoxi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2011-04-12 17:41:10:
后面看到，你的蛋白是用来做双向电泳的，而不是测活的。
因此，低pH的酸应该影响不到蛋白吧。 关键是你加酸量有多少？
难道要加100 mM的HCl处理 一小时？
那菌体估计都要破掉了。


你的菌体的获得很麻烦 ...

我直接用浓盐酸溶，可以吗
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-13 09:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 求调剂 +5 十三加油 2026-03-21 5/250 2026-03-21 18:48 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +6 嘉年新程 2026-03-15 6/300 2026-03-21 17:07 by Dream007008
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3 ￣^￣゜汗 2026-03-19 4/200 2026-03-20 21:01 by zhukairuo
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭