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[交流]
【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决
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| 如题，我在连表达载体的时候载体与片段的摩尔比用了1:8，能长出好多菌落，但在进行菌落PCR的时候全部都是假阳性，我已经P了40多个菌落都是假阳性~~~忘各位虫友不吝赐教，谢谢！！ |
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6楼2011-04-11 13:53:42
★ ★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 去磷是好办法。夜深了，早点休息哦~ 2011-04-10 23:57:30
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励，继续加油啊！ 2011-04-12 10:47:41
yuyan225(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 去磷是好办法。夜深了，早点休息哦~ 2011-04-10 23:57:30
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励，继续加油啊！ 2011-04-12 10:47:41
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遇见过这样的问题。 片段多，载体少，这样的比例没有问题，也可以1：10。 最常见的原因是载体酶切不完全，导致载体自连。通常有两种解决方法： 1、用碱性磷酸酶处理，消化掉5‘端磷酸基团，防止载体自连。但在lz现有的条件下可能会造成阳性率偏低。 2、个人认为最好的解决方法：增加载体酶切的时间。既然是做连接，那应该是保证片段方向的双酶切，不知lz用的什么酶切体系，酶切多长时间？可以尝试酶切时间增加到24小时。 祝lz顺利、好运！ |
2楼2011-04-10 23:49:46
3楼2011-04-11 08:59:02
5楼2011-04-11 09:07:26
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2011-04-11 09:00
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