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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决
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yuyan225

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决

如题，我在连表达载体的时候载体与片段的摩尔比用了1:8，能长出好多菌落，但在进行菌落PCR的时候全部都是假阳性，我已经P了40多个菌落都是假阳性~~~忘各位虫友不吝赐教，谢谢！！
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1楼2011-04-10 16:02:21
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
yuyan225(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3, EPI+1): 高手就是高手 2011-04-12 10:47:06
yuyan225(金币+3): 2011-04-12 15:34:30

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 去磷是好办法。夜深了，早点休息哦~ 2011-04-10 23:57:30
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励，继续加油啊！ 2011-04-12 10:47:41

roomofxw

木虫 (正式写手)
★
yuyan225(金币+1):谢谢参与

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
yuyan225(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-04-11 14:20:17
简单回复
zhaohq12094楼
2011-04-11 09:00   回复  
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-04-11 08:59:02: 载体酶切不完全，去磷酸化是无法解决的………… 酶切不完全的意思是，根本没切开，或者双切只切了其中一段 其实最好的解决方案是，买好一点的内切酶（NEB、Fermentas），切够时间（按照酶活定义计算，再延长一些 ...

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