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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】枯草芽孢杆菌基因敲除~~
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bettyshan

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】枯草芽孢杆菌基因敲除~~

想请教一下做枯草芽孢杆菌的朋友，枯草芽孢杆菌敲除目前有没有无抗敲除的方法呢？那个WB700的菌是利用什么方法获得的，为什么能够敲除那么多的基因？都是用的有抗敲除吗？
如果总是用抗性的话那是不是只能敲除有限的基因啦？~~

谢谢帮我解答啦~~~
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1楼 2011-04-09 11:41:28
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zhuabachon

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你看下文献就知道了啊，BGSC上搜ECE195，这个质粒就是无标记敲除枯草芽孢杆菌上的基因的，用的是一个毒性基因进行二次筛选得到，大名鼎鼎的张小舟博士构建的，你可以看下他的文章。还有他的博士论文。
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7楼2014-05-14 00:39:40
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 呵呵，不错，给予鼓励 2011-04-09 17:54:09
bettyshan(金币+2): 谢谢给了我这么详细的回答~~~ 2011-04-10 15:32:42
想请教一下做枯草芽孢杆菌的朋友，枯草芽孢杆菌敲除目前有没有无抗敲除的方法呢？（你的无抗是指没有抗生素吗？当然有了，不过你自己详细查查，抗生素其实起到的只是帮助筛选的作用，这样可以简化很多实验步骤）

那个WB700的菌是利用什么方法获得的，（这个由于我做的是P.aeruginosa,你说的这个菌还真是没有见过，不过你可以查阅一下相关的资料，绝对有的！）
为什么能够敲除那么多的基因？（不是为什么能够敲除那么多基因，而是看你做什么用，如果必要的话才会去敲除，如果这个基因和你所研究的课题没有任何关系，试问你会无缘无故去敲除它吗？NO，浪费时间！）
都是用的有抗敲除吗？（敲除基因只是研究基因功能的一个方法，当然了还有别的研究基因的方法，敲除也分很多种，插入突变，缺失突变orRNAi都可以的！）
如果总是用抗性的话那是不是只能敲除有限的基因啦？~~（并不是，只要你想敲除某个基因，载体构建好之后就可以进行敲除。。。。）


ps:我一个一个给你解答！见括号！
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2楼2011-04-09 17:49:20
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
rainwander(金币+2): 呵呵，估计是没有，鼓励交流~~ 2011-04-10 00:05:39
lz有查过文献吗？

doi:10.1128/AEM.01156-08
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3楼2011-04-09 19:07:06
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-10 00:05:07
引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2011-04-09 11:41:28:
想请教一下做枯草芽孢杆菌的朋友，枯草芽孢杆菌敲除目前有没有无抗敲除的方法呢？那个WB700的菌是利用什么方法获得的，为什么能够敲除那么多的基因？都是用的有抗敲除吗？
如果总是用抗性的话那是不是只能敲除有 ...

关于敲除有大量的文献报道，要做到反敲除（即抗性基因的敲除）需要合适的质粒，例如温敏型质粒。

可以参考WB600的构建，其实就是在其基础上再敲除了一个蛋白酶，还有WB800也是一样。
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4楼2011-04-09 20:08:45
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