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bettyshan

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】枯草芽孢杆菌基因敲除~~

想请教一下做枯草芽孢杆菌的朋友,枯草芽孢杆菌敲除目前有没有无抗敲除的方法呢?那个WB700的菌是利用什么方法获得的,为什么能够敲除那么多的基因?都是用的有抗敲除吗?
如果总是用抗性的话那是不是只能敲除有限的基因啦?~~

谢谢帮我解答啦~~~
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zhang-829

金虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般情况是利用一个抗性敲除一个基因后,会把这个抗性基因再敲掉。还有一种方法是插入失活,不加入抗性基因。
10楼2016-03-15 13:36:44
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查看全部 10 个回答
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5, EPI+1): 呵呵,不错,给予鼓励 2011-04-09 17:54:09
bettyshan(金币+2): 谢谢给了我这么详细的回答~~~ 2011-04-10 15:32:42
想请教一下做枯草芽孢杆菌的朋友,枯草芽孢杆菌敲除目前有没有无抗敲除的方法呢?(你的无抗是指没有抗生素吗?当然有了,不过你自己详细查查,抗生素其实起到的只是帮助筛选的作用,这样可以简化很多实验步骤)

那个WB700的菌是利用什么方法获得的,(这个由于我做的是P.aeruginosa,你说的这个菌还真是没有见过,不过你可以查阅一下相关的资料,绝对有的!)
为什么能够敲除那么多的基因?(不是为什么能够敲除那么多基因,而是看你做什么用,如果必要的话才会去敲除,如果这个基因和你所研究的课题没有任何关系,试问你会无缘无故去敲除它吗?NO,浪费时间!)
都是用的有抗敲除吗?(敲除基因只是研究基因功能的一个方法,当然了还有别的研究基因的方法,敲除也分很多种,插入突变,缺失突变orRNAi都可以的!)
如果总是用抗性的话那是不是只能敲除有限的基因啦?~~(并不是,只要你想敲除某个基因,载体构建好之后就可以进行敲除。。。。)


ps:我一个一个给你解答!见括号!
2楼2011-04-09 17:49:20
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★ ★
rainwander(金币+2): 呵呵,估计是没有,鼓励交流~~ 2011-04-10 00:05:39
lz有查过文献吗?

doi:10.1128/AEM.01156-08
3楼2011-04-09 19:07:06
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hkfgwww

银虫 (正式写手)


★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-10 00:05:07
引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2011-04-09 11:41:28:
想请教一下做枯草芽孢杆菌的朋友,枯草芽孢杆菌敲除目前有没有无抗敲除的方法呢?那个WB700的菌是利用什么方法获得的,为什么能够敲除那么多的基因?都是用的有抗敲除吗?
如果总是用抗性的话那是不是只能敲除有 ...

关于敲除有大量的文献报道,要做到反敲除(即抗性基因的敲除)需要合适的质粒,例如温敏型质粒。

可以参考WB600的构建,其实就是在其基础上再敲除了一个蛋白酶,还有WB800也是一样。
4楼2011-04-09 20:08:45
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