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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提DNA后有浓度，有OD值，但是跑电泳跑不出来
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w157687883

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提DNA后有浓度，有OD值，但是跑电泳跑不出来已有12人参与

求助了，非常着急。先谢谢各位
       如题，我是手提的土壤中DNA，用DNA提取液（就是CTAB，Tris-HCL什么的），然后摇床30分钟，在加SDS，65摄氏度2小时，之后离心加酚氯仿之类。最后在机器上检测的DNA浓度在600~800ng/微升。260/280值在1.50左右，但是跑电泳0.75%的琼脂糖胶，却跑不出来条带，marker能跑出来，上样量一开始5微升，后来跑大孔的50微升的，也没有，怕是loading buffer少，多加了也没用。电泳的时候能看到loading buffer在跑，但是染色后，拍照就什么条带都没有。做了好几次了，都是这个样子。请问大家有没有这种情况，如果有这种情况，大侠们都是怎么解决的啊，非常着急，谢谢各位了！！！
    如果你也有这情况，或者解决了，可以加我q：157687883

[ Last edited by w157687883 on 2011-4-8 at 16:10 ]
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1楼2011-04-08 15:39:24
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gppwfh

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-08 20:02:24
你跑胶后，你的点样孔里干净吗？不干净，很有可能是核酸不纯，都留在孔里了。我用过CTAB法，但是和你的操作还是不一样。你可以多看看文献参考一下。
用1%的胶跑吧，说不定也有跑出去的可能呢
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2楼2011-04-08 16:33:11
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w157687883

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gppwfh at 2011-04-08 16:33:11:
你跑胶后，你的点样孔里干净吗？不干净，很有可能是核酸不纯，都留在孔里了。我用过CTAB法，但是和你的操作还是不一样。你可以多看看文献参考一下。
用1%的胶跑吧，说不定也有跑出去的可能呢

我是直接拔了梳子，然后点样的，梳子孔应该是干净的，除了能有点碎的胶外，应该没东西了，谢谢你
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3楼2011-04-08 18:52:30
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zmw_520

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): 染色液也会有问题？ 2011-04-09 08:40:25
是不是染色液有问题咧？？？其他胶用同样的染液有条带不？？？
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不明白很多事~~~
4楼2011-04-08 19:28:48
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jjlbest

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议楼主发张图片给上来！这样大家才可以更直观的看结果，只听楼主说，其实这已经掺杂了楼主的主观思想了。
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5楼2011-04-08 19:47:22
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w157687883

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-04-08 19:28:48:
是不是染色液有问题咧？？？其他胶用同样的染液有条带不？？？

我正打算换个染色液，我明天试试
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6楼2011-04-08 21:59:34
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w157687883

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jjlbest at 2011-04-08 19:47:22:
建议楼主发张图片给上来！这样大家才可以更直观的看结果，只听楼主说，其实这已经掺杂了楼主的主观思想了。

恩，好滴，上图
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7楼2011-04-08 21:59:53
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tssy77

木虫 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-04-09 08:40:47
你找对引物PCR试试！我用CTAB法提菌的基因组，有时也没提出来，但PCR也是可以用的，我试过我的，能用的，你不妨试一试
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平常心
8楼2011-04-08 22:41:14
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+6, EPI+1): 专业！ 2011-04-09 08:41:22
引用回帖:
Originally posted by w157687883 at 2011-04-08 21:59:34:
我正打算换个染色液，我明天试试

跟染色液半点关系都没有，你没有提出来DNA。未纯化的DNA测定的OD值基本上没有什么可信的。

可以参考我的这个帖子，希望对你有所帮助：

【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619&fpage=3
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2011-04-08 23:37:21
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w157687883

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-04-08 23:37:21:
跟染色液半点关系都没有，你没有提出来DNA。未纯化的DNA测定的OD值基本上没有什么可信的。

可以参考我的这个帖子，希望对你有所帮助：

【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】

...

谢谢啦，这两天忙着别的事情，没来上网看，
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10楼2011-04-12 16:19:28
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