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烂铁

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于Westrn blot已有8人参与

我又一个问题不懂,想问问大家:
一般做Western blot的二抗可以通用么?我的抗原位点是6*His,上海生工告诉我说“其二抗是以一抗为基础(抗原)免疫动物,得到二抗。”所以可不可以用其他的抗原位点的二抗来做6*His的Western blot呢?
谢谢了!
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看见你开心我会不禁微笑,想起你伤心我会暗暗心疼。
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-28 09:04:44
你一抗选择“某某动物1抗HIS的抗体”,二抗就选择“某某动物2抗某某动物1的抗体HRP”
9楼2011-04-28 08:50:00
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普通回帖

gyq625

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般不都是辣根过氧化酶标记的二抗吗,我也是做western的,上周也打电话咨询了上海生工的公司,他们说他们那有
2楼2011-04-08 12:11:14
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gyq625

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不好意思出了点问题,我打电话过去他们western负责人说,他们那有western blot的试剂盒啊,里面二抗什么的都有的,他还说二抗是通用的,买此试剂盒的只需自筹一抗。。。所以,对你提出的疑问表示同问,等待有识之士答疑解惑
3楼2011-04-08 12:14:43
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yixinling

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-08 20:03:06
引用回帖:
Originally posted by 烂铁 at 2011-04-08 09:55:43:
我又一个问题不懂,想问问大家:
一般做Western blot的二抗可以通用么?我的抗原位点是6*His,上海生工告诉我说“其二抗是以一抗为基础(抗原)免疫动物,得到二抗。”所以可不可以用其他的抗原位点的二抗来做6* ...

一抗是什么动物的啊?
二抗总得是抗这个动物的才行啊。
抗原位点不同只要你的一抗上有其他的位点就没问题。
就怕没有哈,所以其实你这个问题不见得不行,但最好不要这么玩。
4楼2011-04-08 15:23:15
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-10 19:14:38
二抗是与一抗结合的,一抗种类繁多,二抗种类却有限,一般有抗小鼠、抗兔、抗羊等,只分种属,具体选择什么类型的二抗,要根据你的一抗动物源性选择,如一抗为兔抗his多克隆抗体,则二抗选择抗兔的HRP标记二抗即可,同理,如一抗为小鼠抗his单克隆抗体,则二抗选择抗小鼠HRP标记二抗。
实验,实验,还是实验!
5楼2011-04-10 11:41:49
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75372017

木虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
二抗主要就是根据一抗来源来选择。。。我做了很多,二抗就那几种。或者你可以选择直标抗体,就不用为选二抗烦恼了
6楼2011-04-10 17:29:17
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cmtoon

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by ujsyangyong at 2011-04-10 11:41:49:
二抗是与一抗结合的,一抗种类繁多,二抗种类却有限,一般有抗小鼠、抗兔、抗羊等,只分种属,具体选择什么类型的二抗,要根据你的一抗动物源性选择,如一抗为兔抗his多克隆抗体,则二抗选择抗兔的HRP标记二抗即可 ...

正解。
7楼2011-04-10 18:34:04
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luohuacheng

新虫 (小有名气)


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根据一抗,选择二抗。
8楼2011-04-27 22:15:31
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wutongyu77

铜虫 (初入文坛)


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请问楼主个问题
     您的WB结果肯定做出来了吧,我想做WB,但是我没有针对我的精氨酸激酶基因的特异性抗体,那我该怎么办?
选择好自己要走的路,走好自己所选择的路
10楼2011-05-24 19:34:09
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