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【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！ 已有23人参与
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怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！ 我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！ [ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ] |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(EPI+1): 哈哈 epi来也 2011-04-21 12:58:46
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(EPI+1): 哈哈 epi来也 2011-04-21 12:58:46
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如果有了RNA，当然就是表示已经破胞成功了，因为细胞内才有RNA。 我用的抽提液配方为 成分 浓度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L 与你的不一样，我用的方法和你的也不一样 2.4.14.1真菌总DNA的提取 （1）接种菌株至液体培养基中，28℃，180rpm振荡培养3天； （2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体； （3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状； （4）将粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000rpm离心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）之后以等体积氯仿抽提一次； （7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 离心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）电泳检测总DNA的浓度。 |
22楼2011-04-16 14:36:31
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
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1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
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2楼2011-03-28 20:00:30
河外生命
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