应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法
81/1返回列表
查看: 1392  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法

请问各位高手：
BglII线性化质粒，
采用spizizen法和GM法转枯草，
涂LB/红霉素（5或7或10ug/ml）平板筛选，结果：红霉素浓度低的平板大概长30个左右，浓度高的平板长的菌就少，大概10个左右。
鉴定：采用LB/淀粉平板筛选，原理是重组片段插入染色体导致淀粉酶失活。
困惑：至今一个阳性克隆都筛不到。
求助：1.请问还有别的转化方法吗？比如Molecular method for Bacillus specise中的方法。
2.线性化位点可以随便选择吗？BamHI可以用吗？
我应该如何改进啊？
兄弟姐妹们不要吝啬你的知识啊，帮帮小弟吧

[ Last edited by wh7690703 on 2011-4-20 at 15:12 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-22 10:29:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
wh7690703(金币+2):谢谢参与
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流，欢迎常来 2011-03-22 13:33:38
线性化应该没有问题的。能够拿到转化子说明感受应该不是主要问题。可能是定向插入有问题吧，建议看看基因插入的同源臂有没有问题，再就是多做几次转化，多拿些转化子，有时候几率还是很重要的，呵呵
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-03-22 10:53:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
那么，如何提高定向插入呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-22 15:24:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
高手帮助啊
回复此楼
4楼2011-03-24 21:56:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
高手帮助啊
回复此楼
5楼2011-03-25 08:32:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
高手帮助啊
回复此楼
6楼2011-03-25 17:41:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
求助：1.请问还有别的转化方法吗？比如Molecular method for Bacillus specise中的方法。
2.线性化位点可以随便选择吗？BamHI可以用吗？
赞一下 回复此楼
7楼2011-04-20 15:13:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
高手帮助啊
回复此楼
8楼2011-04-27 15:02:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wh7690703 的主题更新
81/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭