应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法
51/1返回列表
查看: 1330  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法

请问各位高手：
BglII线性化质粒，
采用spizizen法和GM法转枯草，
涂LB/红霉素（5或7或10ug/ml）平板筛选，结果：红霉素浓度低的平板大概长30个左右，浓度高的平板长的菌就少，大概10个左右。
鉴定：采用LB/淀粉平板筛选，原理是重组片段插入染色体导致淀粉酶失活。
困惑：至今一个阳性克隆都筛不到。
求助：1.请问还有别的转化方法吗？比如Molecular method for Bacillus specise中的方法。
2.线性化位点可以随便选择吗？BamHI可以用吗？
我应该如何改进啊？
兄弟姐妹们不要吝啬你的知识啊，帮帮小弟吧

[ Last edited by wh7690703 on 2011-4-20 at 15:12 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-22 10:29:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
求助：1.请问还有别的转化方法吗？比如Molecular method for Bacillus specise中的方法。
2.线性化位点可以随便选择吗？BamHI可以用吗？
赞一下 回复此楼
7楼2011-04-20 15:13:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
wh7690703(金币+2):谢谢参与
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流，欢迎常来 2011-03-22 13:33:38
线性化应该没有问题的。能够拿到转化子说明感受应该不是主要问题。可能是定向插入有问题吧，建议看看基因插入的同源臂有没有问题，再就是多做几次转化，多拿些转化子，有时候几率还是很重要的，呵呵
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-03-22 10:53:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
那么，如何提高定向插入呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-22 15:24:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭