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hupeng

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事? 已有8人参与

请问一下各位大虾:
    我pcr反应后出现引物二聚体和多条非特异性扩增带,怎样解决呢?
    还有我目的片段只有87bp,怎样才能跑出一个比较好的结果。
    注:
         pcr反应液:taq酶(5U/μL)  0.2μL
                            10*pcr buffer      2.5μL
                            dNTP                   2μL
                            模板DNA              1.25μL
                            引物1                   1μL
                            引物2                    1μL
                            灭菌水                 up to 25μL
        pcr反应条件:94℃                 50sec
                              54℃                  30sec      (Tm值52℃)
                              72℃                  20sec       共35个循环
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智者务其实,愚者争其名!
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hupeng

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-21 16:21:37:
请问是特异性引物还是简并引物?一般都有引物二聚体,不过设计的时候尽量是用软件看看,还有可以提升下退火,看看能不能消掉费特异性条带,这么短的片段是准备跑qPCR??

是特异性引物。我做的sex marker,引物是别人发表文章里面的,但是我一直没做出结果来!
智者务其实,愚者争其名!
3楼2011-03-21 21:57:04
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
请问是特异性引物还是简并引物?一般都有引物二聚体,不过设计的时候尽量是用软件看看,还有可以提升下退火,看看能不能消掉费特异性条带,这么短的片段是准备跑qPCR??
2楼2011-03-21 16:21:37
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hupeng at 2011-03-21 21:57:04:
是特异性引物。我做的sex marker,引物是别人发表文章里面的,但是我一直没做出结果来!

个人意见,别人的引物试试可以的话就用,不行就自己设计,文章里的引物未必就一定是真的
4楼2011-03-22 08:52:30
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chen4

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-22 08:52:30:
个人意见,别人的引物试试可以的话就用,不行就自己设计,文章里的引物未必就一定是真的

同意楼上的意见,别人发表文章里面的引物未必就一定是真的。
我开始也用别人的引物,但是我一直没做出结果来。
还是自己设计引物吧。
棒棒
5楼2011-03-26 08:26:30
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