应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
51/1返回列表
查看: 3554  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hupeng

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？ 已有8人参与

请问一下各位大虾：
    我pcr反应后出现引物二聚体和多条非特异性扩增带，怎样解决呢？
    还有我目的片段只有87bp，怎样才能跑出一个比较好的结果。
    注：
         pcr反应液：taq酶（5U/μL）  0.2μL
                            10*pcr buffer      2.5μL
                            dNTP                   2μL
                            模板DNA              1.25μL
                            引物1                   1μL
                            引物2                    1μL
                            灭菌水                 up to 25μL
        pcr反应条件：94℃                 50sec
                              54℃                  30sec      （Tm值52℃）
                              72℃                  20sec       共35个循环
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
智者务其实，愚者争其名！
1楼 2011-03-21 15:50:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hupeng at 2011-03-21 21:57:04:
是特异性引物。我做的sex marker，引物是别人发表文章里面的，但是我一直没做出结果来！

个人意见，别人的引物试试可以的话就用，不行就自己设计，文章里的引物未必就一定是真的
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-22 08:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问是特异性引物还是简并引物？一般都有引物二聚体，不过设计的时候尽量是用软件看看，还有可以提升下退火，看看能不能消掉费特异性条带，这么短的片段是准备跑qPCR??
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-21 16:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hupeng

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-21 16:21:37:
请问是特异性引物还是简并引物？一般都有引物二聚体，不过设计的时候尽量是用软件看看，还有可以提升下退火，看看能不能消掉费特异性条带，这么短的片段是准备跑qPCR??

是特异性引物。我做的sex marker，引物是别人发表文章里面的，但是我一直没做出结果来！
赞一下 回复此楼
智者务其实，愚者争其名！
3楼2011-03-21 21:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen4

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-22 08:52:30:
个人意见，别人的引物试试可以的话就用，不行就自己设计，文章里的引物未必就一定是真的

同意楼上的意见，别人发表文章里面的引物未必就一定是真的。
我开始也用别人的引物，但是我一直没做出结果来。
还是自己设计引物吧。
赞一下(1人) 回复此楼
棒棒
5楼2011-03-26 08:26:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭