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buky

铁虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】如何检测蛋白样品中是否含有RNA

现有一个蛋白质样品,要证实里面含有RNA,用什么方法呢,如果测260nm的吸光度有吸收值的话,能确定说明吗?另外还有其它方法吗?谢谢!
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buky(金币+1): 2011-03-21 13:48:47
引用回帖:
Originally posted by buky at 2011-03-16 15:51:24:
现有一个蛋白质样品,要证实里面含有RNA,用什么方法呢,如果测260nm的吸光度有吸收值的话,能确定说明吗?另外还有其它方法吗?谢谢!

不能确定的,因为蛋白本身在260nm也有吸收值的,可以通过琼脂糖电泳看看。
2楼2011-03-16 16:04:39
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buky(金币+1): 2011-03-21 13:49:52
Which kinds of RNA did you expect
could you try rt-pcr
3楼2011-03-16 16:05:13
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yixinling

金虫 (正式写手)


buky(金币+1): 2011-03-21 13:49:16
个人同意rt-pcr。
4楼2011-03-16 16:24:50
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fzfangtao

木虫 (正式写手)


buky(金币+1): 2011-03-21 13:48:56
吸收并不是最佳办法,因为存在最大吸收的问题,其余物质也会产生吸收的,先反转,跑个电泳下
5楼2011-03-16 17:04:29
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)


buky(金币+2): 2011-03-21 13:49:04
引用回帖:
Originally posted by buky at 2011-03-16 15:51:24:
现有一个蛋白质样品,要证实里面含有RNA,用什么方法呢,如果测260nm的吸光度有吸收值的话,能确定说明吗?另外还有其它方法吗?谢谢!

RNA的序列知道吗?量多吗?
1) 直接电泳看看。
1)如果知道序列,可以试试RT-PCR。如果不知道,那就不可行了。
2)如果量多,可以将蛋白化合物用RNA酶酶解了,作为对照,将两种样品走凝胶看看。(理论上,不知道可行不可行)
6楼2011-03-16 18:23:50
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buky

铁虫 (小有名气)


是从总RNA中提取的mRNA,用这mRNA 与一个蛋白作用。因为二者是可以结合的,然后用载体吊出来蛋白-mRNA复合物,现在问题就是如何对吊出来的mRNA进行检测,谢谢大家的回复!
7楼2011-03-17 10:19:09
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buky(金币+2): 2011-03-22 10:00:40
引用回帖:
Originally posted by buky at 2011-03-17 10:19:09:
是从总RNA中提取的mRNA,用这mRNA 与一个蛋白作用。因为二者是可以结合的,然后用载体吊出来蛋白-mRNA复合物,现在问题就是如何对吊出来的mRNA进行检测,谢谢大家的回复!

when you get mRNA, you can do sequencing like 454, I ever read one paper they got some mRNA by protein pulldown and analyzed the sequences
8楼2011-03-21 18:48:09
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buky(金币+3): 2011-03-22 10:00:45
引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2011-03-21 18:48:09:
when you get mRNA, you can do sequencing like 454, I ever read one paper they got some mRNA by protein pulldown and analyzed the sequences

The RNA-binding protein Rrm4 is essential for polarity in Ustilago maydis and shuttles along microtubules

seems to be this paper
9楼2011-03-21 18:49:49
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