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buky

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何检测蛋白样品中是否含有RNA

现有一个蛋白质样品，要证实里面含有RNA，用什么方法呢，如果测260nm的吸光度有吸收值的话，能确定说明吗？另外还有其它方法吗？谢谢！
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1楼 2011-03-16 15:51:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
buky(金币+1): 2011-03-21 13:48:47
引用回帖:
Originally posted by buky at 2011-03-16 15:51:24:
现有一个蛋白质样品，要证实里面含有RNA，用什么方法呢，如果测260nm的吸光度有吸收值的话，能确定说明吗？另外还有其它方法吗？谢谢！

不能确定的，因为蛋白本身在260nm也有吸收值的，可以通过琼脂糖电泳看看。
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2楼2011-03-16 16:04:39
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
buky(金币+1): 2011-03-21 13:49:52
Which kinds of RNA did you expect
could you try rt-pcr
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3楼2011-03-16 16:05:13
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yixinling

金虫 (正式写手)
buky(金币+1): 2011-03-21 13:49:16
个人同意rt-pcr。
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4楼2011-03-16 16:24:50
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fzfangtao

木虫 (正式写手)
buky(金币+1): 2011-03-21 13:48:56
吸收并不是最佳办法，因为存在最大吸收的问题，其余物质也会产生吸收的，先反转，跑个电泳下
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5楼2011-03-16 17:04:29
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
buky(金币+2): 2011-03-21 13:49:04
引用回帖:
Originally posted by buky at 2011-03-16 15:51:24:
现有一个蛋白质样品，要证实里面含有RNA，用什么方法呢，如果测260nm的吸光度有吸收值的话，能确定说明吗？另外还有其它方法吗？谢谢！

RNA的序列知道吗？量多吗？
1) 直接电泳看看。
1）如果知道序列，可以试试RT-PCR。如果不知道，那就不可行了。
2）如果量多，可以将蛋白化合物用RNA酶酶解了，作为对照，将两种样品走凝胶看看。（理论上，不知道可行不可行）
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6楼2011-03-16 18:23:50
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buky

铁虫 (小有名气)
是从总RNA中提取的mRNA，用这mRNA 与一个蛋白作用。因为二者是可以结合的，然后用载体吊出来蛋白-mRNA复合物，现在问题就是如何对吊出来的mRNA进行检测，谢谢大家的回复！
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7楼2011-03-17 10:19:09
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
buky(金币+2): 2011-03-22 10:00:40
引用回帖:
Originally posted by buky at 2011-03-17 10:19:09:
是从总RNA中提取的mRNA，用这mRNA 与一个蛋白作用。因为二者是可以结合的，然后用载体吊出来蛋白-mRNA复合物，现在问题就是如何对吊出来的mRNA进行检测，谢谢大家的回复！

when you get mRNA, you can do sequencing like 454, I ever read one paper they got some mRNA by protein pulldown and analyzed the sequences
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8楼2011-03-21 18:48:09
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
buky(金币+3): 2011-03-22 10:00:45
引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2011-03-21 18:48:09:
when you get mRNA, you can do sequencing like 454, I ever read one paper they got some mRNA by protein pulldown and analyzed the sequences

The RNA-binding protein Rrm4 is essential for polarity in Ustilago maydis and shuttles along microtubules

seems to be this paper
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9楼2011-03-21 18:49:49
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