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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】使用荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧，为什么荧光强度随时间而增强呢？
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hjing6140

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】使用荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧，为什么荧光强度随时间而增强呢？

请问一下，最近使用荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧，为什么荧光强度随时间而增强呢？没有流式细胞仪，而是将细胞吹打开后移入比色杯中测定。
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1楼 2011-03-14 09:35:50
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酸奶一号

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道楼主所测为哪种生物体细胞，此外所谓的吹打是要将细胞破碎的那种吗？一般来说荧光探针与细胞标记后可以直接测定，但需要迅速，因为细胞会随着时间不断下沉，从而影响测定结果。可以进一步交流，相互学习！
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2楼2014-11-18 15:24:28
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dida001

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
使用说明如下，20-30分钟后才可能是最强的。其次 荧光强度越强说明产生ros多啊
1. 装载探针
对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平.
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3楼2020-12-08 15:31:20
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