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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于HPLC测定多糖组成的几个疑问
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IllusionLase

新虫 (小有名气)

[求助] 【求助】关于HPLC测定多糖组成的几个疑问

1.我打算用PMP做柱前衍生化然后进样，但是许多文献都用的是柱长250mm的C18反相柱。我手头只有安捷伦的Eclipse C8反相柱，柱长150mm内径4mm。请问使用以上两种色谱柱的色谱结果有什么区别？
2.今天用葡萄糖（分析纯）配了0.1mmol/L的标准品溶液，做完衍生化后稀释500倍做UV-Vis扫描，扫描波长190-700nm，发现除了目标峰之外还有个最大吸收波长为197.9nm的强峰。怀疑是所用蒸馏水中杂质，可对蒸馏水扫描同样的波长范围却没有这个峰的存在。后来抱着怀疑的心态用之前剩余的标准品葡萄糖溶液稀释500倍后做波长扫描，发现有个最大吸收波长为204.7nm的吸收峰（吸光度2.584A）。调零用的是同样的蒸馏水。可葡萄糖溶液不应该是几乎没有紫外吸收的么？
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1楼2012-05-07 00:01:31
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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IllusionLase: 金币+5, Good Job 2012-05-07 19:02:51
1. C8和C18的保留效果不太一样，把流动相略调一下即可
2. 200nm末端吸收的峰不必太关心，可能来源于你的衍生化过程，只要不影响你的测定就OK
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梦想、激情、灵感、体验--che
2楼2012-05-07 08:55:18
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swt1898

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是啊，糖类化合物一般是用专用柱或者氨基柱的，检测器要用示差折光的
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3楼2012-05-07 10:49:03
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IllusionLase

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guevara1967 at 2012-05-07 08:55:18:
1. C8和C18的保留效果不太一样，把流动相略调一下即可
2. 200nm末端吸收的峰不必太关心，可能来源于你的衍生化过程，只要不影响你的测定就OK

我用的流动相是乙腈+pH6.9磷酸盐缓冲液，是要调整比例还是更换流动相组成？
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4楼2012-05-08 13:26:57
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
soundhorizo: 金币+3 2012-05-08 16:30:06
相比于C18的流动相，调整一下比例
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梦想、激情、灵感、体验--che
5楼2012-05-08 15:18:51
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