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hjing6140

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助】使用荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧,为什么荧光强度随时间而增强呢?

请问一下,最近使用荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧,为什么荧光强度随时间而增强呢?没有流式细胞仪,而是将细胞吹打开后移入比色杯中测定。
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酸奶一号

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不知道楼主所测为哪种生物体细胞,此外所谓的吹打是要将细胞破碎的那种吗?一般来说荧光探针与细胞标记后可以直接测定,但需要迅速,因为细胞会随着时间不断下沉,从而影响测定结果。可以进一步交流,相互学习!
2楼2014-11-18 15:24:28
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dida001

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
使用说明如下,20-30分钟后才可能是最强的。其次 荧光强度越强说明产生ros多啊
1. 装载探针
对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞,后装载探针。
原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA,使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA不少于1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平.
3楼2020-12-08 15:31:20
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