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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 【求助】在主峰位置出现杂质峰怎么办
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szx1984

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】在主峰位置出现杂质峰怎么办 已有7人参与

做头孢唑啉钠有关物质实验过程出现不进样在主峰位置出现杂质峰，走的是梯度，在其它实验室做就不出现，系统用异丙醇冲洗过，可以排除有机相和柱子因素，无机盐也换了几个厂家，用的是娃哈哈纯净水，请教一下高手怎么解决？谢谢！
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1楼 2011-03-08 17:04:09
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
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木笑笑(金币+1): 谢谢参与 2011-03-09 10:51:54
楼主采用的溶剂比例可能有问题，当比例达到某个值时，可能混合器无法完全排除气泡，导致出现上面所说现象，方便的话，看看你的流动相及其比例
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Yesterday.Today,Tomorrow！
2楼2011-03-08 20:51:46
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rabit5522

木虫 (著名写手)
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木笑笑(金币+2): 谢谢 2011-03-09 10:52:06
既然在其他的HPLC里没有此峰，就说明了，跟你的机器有关，通常造成这种现象的原因是残留的杂志，如果你的机器带有收集功能的话，可以少量收集该峰后定性，看是否是杂志，如若是杂质，那么可能是在进样针等处。可以通过换柱子，洗针，更换溶剂等方式来一一排除。如果不是杂质那可能就是梯度更换是导致的压力不稳出现的，可以注意观察出峰前后的压力变化。。这个问题只能是一个一个排除了。
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3楼2011-03-08 21:58:11
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szx1984

铜虫 (初入文坛)
方法是药典方法，流动相A是磷酸氢二钠2.91g和磷酸二轻钾0.71g溶解至1000ml，流动相B是乙腈，走梯度  时间       A               B
                                2               98             2
                               4                85             15
                               10              60            40
                               11.5           35            65  
                               12              35             65   
上面是部分梯度，出峰时间大约11.5
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4楼2011-03-09 13:17:24
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xph@hh

新虫 (小有名气)
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koria0727(金币+1): 鼓励新虫参与。 2011-03-09 13:23:51
我觉得可能是进样口不太干净，有杂质；不防冲洗一下，试试。
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5楼2011-03-09 13:22:06
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elescaller

铁杆木虫 (知名作家)

铁杆木虫 (无名作家)
以前也遇到过这情况，走梯度出现很多鬼峰，与楼主不同的是，我排查了一切因素，包括水、缓冲盐、有机相、色谱柱等等，色谱仪从安捷伦1200改成1100，又改成Waters，还是没有解决

原因可能就像2楼说的，溶剂比例达到某个值的时候，有气泡干扰。希望高手解惑！

[ Last edited by elescaller on 2011-3-9 at 13:40 ]
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6楼2011-03-09 13:37:56
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elescaller

铁杆木虫 (知名作家)

铁杆木虫 (无名作家)
另外，我不明白，既然出峰时间是11.5，为什么楼主要在11.5改变梯度？梯度洗脱的转折点之后一两分钟往往会有因压力变化而带来的馒头峰，这样的方法不太好吧？
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7楼2011-03-09 13:44:13
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szx1984

铜虫 (初入文坛)
不好意思！是10.5出峰准确说是10.88，方法是药典上的，如果改怎么改梯度比较好？
我们用的是岛津LC-10A液相，我同事已经折腾一周了，今天我接手排查，像五楼一样尽可能排除一切因素（包括水、缓冲盐、有机相、色谱柱等换同一实验室仪器做），把混合器都排查了，没有解决，我也在想流动相及比例问题，领导让我三天解决，愁死我了，希望各位大侠指点迷津,谢谢
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8楼2011-03-09 22:09:05
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)
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引用回帖:
Originally posted by szx1984 at 2011-03-09 13:17:24:
方法是药典方法，流动相A是磷酸氢二钠2.91g和磷酸二轻钾0.71g溶解至1000ml，流动相B是乙腈，走梯度  时间       A               B
                                2               98             2
       ...

正如楼主的在十分钟的流动相比例接近50:50，此比例下流动相粘度一般最大，混合器在混合时不能完全排气泡，造成有杂质峰干扰主峰
另外，我们也用岛津的SPD-10AVP泵，双泵在这个比例有这个问题，混合后单泵走流动相就没有上述现象了，建议楼主试一下该种方法
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9楼2011-03-09 23:28:50
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胡宝龙
10楼2012-02-08 19:58:01
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