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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】血细胞计数板计数与流式相差一倍，怎么解决？
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WAX2010

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】血细胞计数板计数与流式相差一倍，怎么解决？

细胞计数过程

1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。

2.制备计数用的细胞悬液：用移液器吸100μL细胞悬液到一离心管中，加入100μL PBS进行稀释。


3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取10μL悬液沿盖片边缘缓缓滴入，盖片下充满悬液。


4.统计四个大格的细胞数：数出四角的四个大格（每个大格含有16个中格）中的细胞数目。一般我计数时每个大格里有50个细胞。


5.计算原细胞悬液的细胞数L：按照下面公式计算细胞密度：

（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4)×2×104

说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以2因为细胞悬液稀释一倍。

流式计数

细胞计数板计完数后取一定量的细胞（如500万个），经过几次离心重悬后上流式计数。离心速度为1000rpm/min，离心4min，转子为水平转子。而跑完流式只计到200万到300万个细胞。

不知中间出现什么错误导致这种结果，还望各位指点！
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1楼 2011-03-07 10:58:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
WAX2010(金币+1): 2011-03-07 11:17:52
WAX2010(金币+1): 2011-03-09 20:30:43
WAX2010(金币+6): 2011-03-15 08:48:34
把碎片也数进去了吧
流式的话，圈掉碎片就没那么多了
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2楼2011-03-07 11:15:01
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WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-07 11:15:01:
把碎片也数进去了吧
流式的话，圈掉碎片就没那么多了

没有啊，悬液中细胞碎片很少的。
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3楼2011-03-07 11:19:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
看天(金币+1): 鼓励 2011-03-07 11:44:27
WAX2010(金币+1): 2011-03-08 09:00:15
引用回帖:
Originally posted by WAX2010 at 2011-03-07 11:19:19:
没有啊，悬液中细胞碎片很少的。

那就是离心神马的损失或者损失细胞到时候流式结果就少了
而且计数的时候主观性也强一点
各种因素导致偏差
这个还算好的啦，差不到半个数量级
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4楼2011-03-07 11:34:36
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
看天(金币+3): 呵呵 好 2011-03-07 11:44:48
WAX2010(金币+1): 2011-03-07 11:44:54
WAX2010(金币+1): 2011-03-08 09:00:32
WAX2010(金币+1): 2011-03-09 20:30:29
WAX2010(金币+6): 2011-03-15 08:48:44
差一半很正常啊.
血细胞计数板本来就是个不可以精确定量的，一般定下数量级就差不多了。
你同一个样本，同样的方式稀释操作，计数，数出来的都很大差别。而且这个跟不同的人操作，不同的手法都有关系，不能较真。不信的话一个样本稀释两次数数看，反正我稀释两次数，没有一次是一样的。差一半什么的都是很常见
流式细胞仪的话，它是一个一个数的，虽然圈出去的碎片里可能也有细胞，而且圈细胞的时候也不是那么的精确，但是相对来说，还是比较精确的。
OVER
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5楼2011-03-07 11:40:50
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WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-07 11:40:50:
差一半很正常啊.
血细胞计数板本来就是个不可以精确定量的，一般定下数量级就差不多了。
你同一个样本，同样的方式稀释操作，计数，数出来的都很大差别。而且这个跟不同的人操作，不同的手法都有关系，不能较真 ...

恩，多谢啦！
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6楼2011-03-07 11:45:58
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Chlo_Q

木虫 (著名写手)
WAX2010(金币+1): 2011-05-05 16:39:34
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-07 11:40:50:
差一半很正常啊.
血细胞计数板本来就是个不可以精确定量的，一般定下数量级就差不多了。
你同一个样本，同样的方式稀释操作，计数，数出来的都很大差别。而且这个跟不同的人操作，不同的手法都有关系，不能较真 ...

那，如果用细胞计数来测定细胞生长曲线。。。不是根本很难做也来？？
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7楼2011-04-12 14:17:45
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WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Chlo_Q at 2011-04-12 14:17:45:
那，如果用细胞计数来测定细胞生长曲线。。。不是根本很难做也来？？

如果每次误差都一致的话，可能生长曲线趋势应该差不多吧！
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8楼2011-05-05 16:39:24
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Chlo_Q

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by WAX2010 at 2011-05-05 16:39:24:
如果每次误差都一致的话，可能生长曲线趋势应该差不多吧！

嗯，我后来用计数法做了生长曲线了，做出来挺好的
就是记数的时候太累了眼睛
另一点，取样时，最好分别取两次，读四个大格只能保证消除分散时的误差
取样的误差必须通过多数取样来检验
我设了三个复孔，每个复孔还要计两次，最后取6个值的平均值
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9楼2011-05-05 20:13:11
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网上淘201100

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
297183楼: Originally posted by WAX2010 at 2011-03-07 10:58:13
细胞计数过程

1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。

2.制备计数用的细胞悬液：用移液器吸100μL细胞悬液到一离心管中，加入100μL PBS进行稀释。


3.将细胞悬液滴入计数板： ...

弱弱的问一句，10的四次方是哪里来的
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10楼2012-10-30 16:52:19
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WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1367984楼: Originally posted by 网上淘201100 at 2012-10-30 16:52:19
弱弱的问一句，10的四次方是哪里来的...

体积换算来的，计数板上的计数区只有0.1μL而计算公式是是推测的1ml里面的细胞数
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11楼2012-10-31 09:52:26
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网上淘201100

铜虫 (小有名气)
内容已删除
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12楼2012-11-01 08:28:57
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yesu1949

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问流式测细胞数，需要怎么处理呢？
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13楼2013-04-09 17:48:29
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WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yesu1949 at 2013-04-09 17:48:29
请问流式测细胞数，需要怎么处理呢？

消化成单细胞，重悬后检测即可
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14楼2013-04-10 17:27:27
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