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银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】血细胞计数板计数与流式相差一倍，怎么解决？

细胞计数过程

1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。

2.制备计数用的细胞悬液：用移液器吸100μL细胞悬液到一离心管中，加入100μL PBS进行稀释。

3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取10μL悬液沿盖片边缘缓缓滴入，盖片下充满悬液。

4.统计四个大格的细胞数：数出四角的四个大格（每个大格含有16个中格）中的细胞数目。一般我计数时每个大格里有50个细胞。

5.计算原细胞悬液的细胞数L：按照下面公式计算细胞密度：

（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4)×2×104

说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以2因为细胞悬液稀释一倍。

流式计数

细胞计数板计完数后取一定量的细胞（如500万个），经过几次离心重悬后上流式计数。离心速度为1000rpm/min，离心4min，转子为水平转子。而跑完流式只计到200万到300万个细胞。

不知中间出现什么错误导致这种结果，还望各位指点！

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1楼2011-03-07 10:58:13

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-07 11:15:01:
把碎片也数进去了吧
流式的话，圈掉碎片就没那么多了

没有啊，悬液中细胞碎片很少的。

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3楼2011-03-07 11:19:19

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Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-07 11:40:50:
差一半很正常啊.
血细胞计数板本来就是个不可以精确定量的，一般定下数量级就差不多了。
你同一个样本，同样的方式稀释操作，计数，数出来的都很大差别。而且这个跟不同的人操作，不同的手法都有关系，不能较真 ...

恩，多谢啦！

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6楼2011-03-07 11:45:58

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