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清水塘

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】微生物生长曲线

大家好!我想做一个醋酸菌的生长曲线以及醋酸发酵试验,但现在不知道怎么做了,请大家帮助哦。偶是这样想的:

一 斜面菌种活化:
       挑取一环活化好的斜面菌种,接种于装有10mL种子培养基的大试管中, 30℃,180r/min振荡培养24h;

二 生长曲线测定:
     按照1%的接种量,将活化好的试管种子接种于装有100mL种子培养基的250mL的三角瓶中,共8瓶, 30℃,180r/min振荡培养,每小时取样测定三角瓶培养液的OD值,以培养时间为横坐标,菌悬液的OD值为纵坐标,绘制其生长曲线。

三 发酵培养:
       根据醋酸菌的生长曲线,取对数生长期的三角瓶培养液按照10%的接种量接入到发酵培养基。
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chenyyy

无虫 (正式写手)


清水塘(金币+2): 2011-03-10 19:46:52
我以前的毕业论文是这样做的     生长曲线
(1)三角瓶培养到对数生长期作为种子液
(2)用250mL的三角瓶配培养基,每瓶装液量约30mL,估计得20来瓶。用种子液接种1mL/瓶,保证接种量一致。
(3)发酵培养,每隔8小时取样,每次取三瓶,分别检测菌体生物量(用蒸馏水干净后,烘干到恒重;OD值也可以测),还有其它你需要的指标,如目产物浓度、C源等等。一定要测到整个生长曲线,延滞期(适应期)、指数期、稳定期和衰亡期。
最后就是作图了,分析的指标越多,越好。
8楼2011-03-10 15:27:21
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普通回帖

tdong06

木虫 (正式写手)



看天(金币+1): 鼓励回答 2011-03-07 16:30:38
清水塘(金币+2): 2011-03-07 19:29:18
引用回帖:
Originally posted by 清水塘 at 2011-03-05 20:43:15:
大家好!我想做一个醋酸菌的生长曲线以及醋酸发酵试验,但现在不知道怎么做了,请大家帮助哦。偶是这样想的:

一 斜面菌种活化:
       挑取一环活化好的斜面菌种,接种于装有10mL种子培养基的大试管中, 30 ...

生长曲线,我觉得最好是平行试验,不要在三角瓶中取样,那样比较容易污染,而且数据也不是最准确的。
2楼2011-03-05 21:16:39
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wlsky24

新虫 (正式写手)


接种量会影响生长的。可以摸一下。还有好像不用每个小时测的
3楼2011-03-07 13:26:48
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)


清水塘(金币+2): 2011-03-07 19:29:28
引用回帖:
Originally posted by tdong06 at 2011-03-05 21:16:39:
生长曲线,我觉得最好是平行试验,不要在三角瓶中取样,那样比较容易污染,而且数据也不是最准确的。

能具体说下你的平行试验么?还有如果不在三角瓶中取样,那在哪里取样呢?
4楼2011-03-07 15:02:13
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waiter

木虫 (著名写手)


清水塘(金币+2): 2011-03-07 19:29:49
把活化好的接种到一三角瓶中。 然后再把三角瓶中的接种好的发酵液分装到试管(空灭好的)中。(培养基量根据试管量,可以20~30根10ml试管,每管5ml左右) 在试管中培养,每两小时取两管测OD。用平均值来做曲线。
5楼2011-03-07 16:56:57
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清水塘

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by tdong06 at 2011-03-05 21:16:39:
生长曲线,我觉得最好是平行试验,不要在三角瓶中取样,那样比较容易污染,而且数据也不是最准确的。

文献上写道,挑取一环斜面菌种,接种到三角瓶中,培养至对数后期,作为种子液接种到发酵培养基中。我觉得他们菌种只培养了一次,而我的设计却培养了两次。
6楼2011-03-07 19:27:15
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tdong06

木虫 (正式写手)


清水塘(金币+2): 2011-03-08 12:45:04
引用回帖:
Originally posted by 清水塘 at 2011-03-07 19:27:15:
文献上写道,挑取一环斜面菌种,接种到三角瓶中,培养至对数后期,作为种子液接种到发酵培养基中。我觉得他们菌种只培养了一次,而我的设计却培养了两次。

文献写的不一定都合理的,这个要看你自己了,其实没有什么大不了的,也不用太纠结。
7楼2011-03-08 10:17:06
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郝钊

金虫 (小有名气)


如果用三角瓶培养,取样次数多了就不能真实反应培养的过程。我之前做过一年的发酵,尽管我们用的菌株不同,但是我个人认为,你没有必要非把菌体生长状态卡在对数期的前期或者中期,只要在对数期就可以,不就是要个好点的种子吗?我想你做了那么久的培养,生长到什么状态是对数期,还用测定吗?培养到刚刚浑浊不就可以了?如果你非要一个好的数据,那就用一个大点的瓶培养,尽量少取样,以免影响后期生长。
9楼2011-03-10 17:20:26
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文献,国内的中文论文都不能算文献,最好找SCI论文,质量高一些。
10楼2011-03-10 17:22:06
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国内的都算文章,不一定有参考价值,虽然也有质量优的,但不知道哪篇好哪篇不好,也就抱着怀疑的态度了。文献才有参考价值。
11楼2011-03-10 17:24:31
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清水塘

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by chenyyy at 2011-03-10 15:27:21:
我以前的毕业论文是这样做的     生长曲线
(1)三角瓶培养到对数生长期作为种子液
(2)用250mL的三角瓶配培养基,每瓶装液量约30mL,估计得20来瓶。用种子液接种1mL/瓶,保证接种量一致。
(3)发酵培养,每 ...

请问一下,你的种子培养基和发酵培养基是什么配方?我的种子和发酵培养基是葡萄糖2%,酵母膏1.5%,种子加3%乙醇,发酵加5%的乙醇。一般培养到多长时间才到对数期。
12楼2011-03-10 19:49:29
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chenyyy

无虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 清水塘 at 2011-03-10 19:49:29:
请问一下,你的种子培养基和发酵培养基是什么配方?我的种子和发酵培养基是葡萄糖2%,酵母膏1.5%,种子加3%乙醇,发酵加5%的乙醇。一般培养到多长时间才到对数期。

各种菌株都不一样,没有借鉴作用

如果你不清楚的话,就多做些摇瓶,每4小时取一次样,辛苦一下,争取一次做成功
13楼2011-03-10 22:33:53
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朱青青1988

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
451209楼: Originally posted by 郝钊 at 2011-03-10 17:20:26
如果用三角瓶培养,取样次数多了就不能真实反应培养的过程。我之前做过一年的发酵,尽管我们用的菌株不同,但是我个人认为,你没有必要非把菌体生长状态卡在对数期的前期或者中期,只要在对数期就可以,不就是要个好 ...

我想问一下,我有个菌株要做感受态,是阴性菌,但不知道什么是对数期,想测个生长曲线,我看了有些人说测到一定程度是需要稀释才比较准确,没有做过,请教一下
14楼2012-10-30 15:37:59
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涵宝0619

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
接种量怎么计算?

发自小木虫Android客户端
15楼2017-03-22 22:24:15
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鷰子

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
亲,你的醋酸菌生长曲线做的时候每隔多久取一次样

发自小木虫Android客户端
16楼2017-12-22 11:19:38
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