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luollm

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】基因敲除工作中遇到了问题：对于一个全耐的菌株，选择什么筛选标记比较�

本人在做基因敲除的课题，研究 X目的基因与耐药性的关系，拟敲除该目的基因。但X基因仅400bp，担心同源臂不够长故扩增了该 X目的基因上下游各300bp左右的序列。现在遇到的问题是，想把全耐菌株中的X基因敲除，以更好地解释结果，那么最好将该目的基因中间插入一个筛选标记。对于全耐菌株，什么筛选标记合适呢？本人是新手，很多基础的东西也都还没弄懂，希望虫友们多多帮助！谢谢噶。。。

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1楼 2011-03-03 21:36:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

luollm(金币+1): 谢谢，我们也考虑到了EGFP，问题是EGFP插入后的表达需不需要启动子呢？直接插入进去就能表达吗？ 2011-03-03 22:26:55

GFP 不知道行不行

2楼2011-03-03 21:44:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

luollm(金币+5): 谢谢指导！我的QQ 304316349，希望能向你请教一些问题，谢谢。。。 2011-03-05 14:27:28

不能用抗性筛选，就用其他的，如楼上的荧光，或者也可以用营养缺陷型筛选。
一般筛选标记肯定是需要和调控序列一起扩增下来的。

3楼2011-03-04 09:47:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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