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pitty595

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】特异性引物的设计已有10人参与

需要设计针对某一微生物的16S rRNA gene特异性的引物,要求连97%相似性的相邻细菌都不能扩增,即非常特异的引物,大家有什么好方法和建议么?我花了很长时间设计,BLAST比对后发现特异性很高,可是PCR实验时却还是很扩增相邻16S。郁闷……
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青春驿站

新虫 (小有名气)

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rainwander(金币+2): 鼓励交流!!! 2011-04-12 19:52:46
引用回帖:
Originally posted by pitty595 at 2011-02-25 05:01:36:
需要设计针对某一微生物的16S rRNA gene特异性的引物,要求连97%相似性的相邻细菌都不能扩增,即非常特异的引物,大家有什么好方法和建议么?我花了很长时间设计,BLAST比对后发现特异性很高,可是PCR实验时却还是 ...

我也很想知道关于这16S rRNA 的引物设计问题,搜到了一个文献,可以看一下。具体应该怎么选择我其实也不是很清楚,看来还得多看些资料多加学习才行啊。
世界睡了,我醒着。。
6楼2011-04-12 19:24:40
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青春驿站

新虫 (小有名气)

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wolfebst(金币+3): 感谢交流 2011-04-14 16:42:51
rainwander(EPI+1): 2011-04-14 17:25:02
引用回帖:
Originally posted by 青春驿站 at 2011-04-12 19:24:40:
我也很想知道关于这16S rRNA 的引物设计问题,搜到了一个文献,可以看一下。具体应该怎么选择我其实也不是很清楚,看来还得多看些资料多加学习才行啊。

想再说明一下:之前传这个文献之前我没有很仔细的阅读过,然后去打印出来的看了一遍,发现这篇文献上漏洞其实不少,而且关于引物设计问题说明的也不是很详细,已经下载看过的同志择其优就好。

错误的地方:综述部分的第七行
rRNA 是细菌和真核细胞核糖体的基本组成部分, 编码rRNA 的基因是按5′- 16S- 23S- 5S-3′方式排列的, 由两个非编码的间隔区序列所分开。

前面一句会让人产生误解,“编码rRNA 的基因是按5′- 16S- 23S- 5S-3′方式排列的, 由两个非编码的间隔区序列所分开。”指的是细菌的。行内人应该会知道,但是会误导初学者或行外人。

有哪位虫友有关于引物设计的比较好的文献也分享下,真的得恶补这方面的知识。
世界睡了,我醒着。。
8楼2011-04-14 12:05:30
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