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pitty595铜虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】特异性引物的设计已有10人参与
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| 需要设计针对某一微生物的16S rRNA gene特异性的引物，要求连97%相似性的相邻细菌都不能扩增，即非常特异的引物，大家有什么好方法和建议么？我花了很长时间设计，BLAST比对后发现特异性很高，可是PCR实验时却还是很扩增相邻16S。郁闷…… |
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6楼2011-04-12 19:24:40
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wolfebst(金币+3): 感谢交流 2011-04-14 16:42:51
rainwander(EPI+1): 2011-04-14 17:25:02
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
wolfebst(金币+3): 感谢交流 2011-04-14 16:42:51
rainwander(EPI+1): 2011-04-14 17:25:02
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想再说明一下：之前传这个文献之前我没有很仔细的阅读过，然后去打印出来的看了一遍，发现这篇文献上漏洞其实不少，而且关于引物设计问题说明的也不是很详细，已经下载看过的同志择其优就好。 错误的地方：综述部分的第七行 rRNA 是细菌和真核细胞核糖体的基本组成部分, 编码rRNA 的基因是按5′- 16S- 23S- 5S-3′方式排列的, 由两个非编码的间隔区序列所分开。 前面一句会让人产生误解，“编码rRNA 的基因是按5′- 16S- 23S- 5S-3′方式排列的, 由两个非编码的间隔区序列所分开。”指的是细菌的。行内人应该会知道，但是会误导初学者或行外人。 有哪位虫友有关于引物设计的比较好的文献也分享下，真的得恶补这方面的知识。 |
8楼2011-04-14 12:05:30
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