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olifor2010

金虫 (正式写手)

[交流] 【交流】HPLC相同条件下,为何我们检测不出主峰杂质? 已有8人参与

现在的问题是,一种样品,相同批次,色谱条件相同,为何我公司检测不出杂质,而客户就能检测出杂质?
色谱条件如下:
       色谱柱——Hypersil BDS C18色谱柱(250mm*4.6mm*5µm)
       流动相—— 溶剂A:溶剂B=90:10

    溶剂A—用水溶解2.33g庚烷磺酸钠,加2.5ml的85%的磷酸,溶于400ml水中,用25%的氨水调节pH为2.5后加水至500.0ml。

    溶液B—乙腈
检测波长——205±4nm,标准360±20nm。
流速:1mL/min
色谱仪:Agilent1100 DAD HPLC
现在的问题是: 客户检我们每一批样品主峰后的一个杂质,而我们怎么检主峰后都没有杂质?但他们的溶剂进样后与我们是一致的,
客户检的色谱图如下:
局部方法图如下:

客户标准中要求系统适用性与系统精密度我们完全达到了。
即我们检测不出客户检的8.3min的杂质。
请教高手帮助分析下原因,多谢!




[ Last edited by olifor2010 on 2011-2-23 at 18:57 ]
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olifor2010

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by bronzezt at 2011-02-23 14:24:27:
如果流动相处理是一致的话  就是柱子的问题了  我们以前也遇到过  客户的柱子比较好 就能检测出异构体  而我们就测不出

使用的是同一品牌的统一种类与规格的色谱柱。现在只能说不是同一根了
5楼2011-02-23 18:59:22
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olifor2010

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 80年后 at 2011-02-24 07:09:16:
1 可能是色谱柱的问题
2流动相A一定要控制好 因为离子对试剂要求还是比较严格的
3 DAD是不是有BW的要求
4相同条件下多波长扫描 看是不是确实有这个杂质

1、色谱柱换过一根新的,检不出来,再换,确定,有问题可能性不大;
2、离子对试剂的质量是否影响很大,是否会影响基线噪声;
3、DAD有样品带宽与参比带宽的要求,完全一致;
4、3维立体图,仔细看,没有!
今日客户传来新谱图,对比后发现我方的基线噪声很大,杂质完全可能会淹没在噪声里。
对与第2点“离子对试剂的影响”我很感兴趣,能否与您进一步交流呢?
多谢老师了
7楼2011-02-26 21:16:00
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olifor2010

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 80年后 at 2011-02-26 21:53:42:
我找了一篇以前看的文章,是关于离子对的,现在也在做,出了很多问题,不知道是否适合你了解离子对试剂。

离子对试剂介绍
离子对试剂的优点
在过去,带电荷分析物的色谱分离通过离子抑制(小心调节流动相P ...

首先非常感谢您老师!感谢您在百忙之中抽出时间来回复我,您是如此的热情与慷慨:)
您发的这篇文章对我帮助很大,使我意识到离子对色谱的流动相的pH值是非常重要的;
正如文章中所说,流动相的pH值控制非常精确,才可以;
我们实验室分别使用了5个人配置的流动相,2个人的出现了主峰分叉,即多峰现象,目前我还不是太明白原因(一般色谱出现多峰是由于柱填料塌陷造成的),1个人配置的流动相主峰后有小台阶状突起,2个人配置流动相主峰非常漂亮;
老师您能否就pH原因造成分叉进行进一步的讲解呢?
10楼2011-02-27 22:58:16
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