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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNAi的一个问题
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白色雨花石

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNAi的一个问题

问题如下，请帮忙解答下：

RNA干涉（RNA interference, RNAi ）是一种快速、有效的研究基因功能的方法，但缺点是有时会导致非特异效应，即影响了其它基因的功能，因而产生非特异性的表型。若过表达基因A序列片段构建的RNAi导致了一定的表型，如何证明所观察到的表型是由于此RNAi特异性地影响了其靶基因的表达所引起？举出至少两种实验方法（其中一种为遗传学方法）验证你的解释。
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1楼 2011-02-21 19:56:33
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夏尔list

金虫 (著名写手)
将潜在的序列和相应的基因组数据库（人，或者小鼠，大鼠等等）进行比较，排除那些和其他编码序列/EST 同源的序列。
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7楼2011-02-23 22:24:06
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白色雨花石

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-23 12:14:14:
表型拯救
RACE

你好，可以帮忙给详细说下么？没做过这方面的东西，不太明白。谢谢了
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5楼2011-02-23 20:08:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-02-24 09:14:18
白色雨花石(金币+5): 谢谢了，用遗传学的方法怎么弄呢？ 2011-03-01 22:32:34
引用回帖:
Originally posted by 白色雨花石 at 2011-02-23 20:08:30:
你好，可以帮忙给详细说下么？没做过这方面的东西，不太明白。谢谢了

1、表型拯救：过表达干扰的靶基因，看是否对抗RNAi的效果
2、RACE：看目的靶位是不是被切割了

请查相关的文献
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6楼2011-02-23 21:10:40
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sutao1979

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-02-24 09:14:26
白色雨花石(金币+15): 谢谢了。 2011-03-01 22:34:30
挺容易的啊，RNAi有两种方法一个是miRNA另一个是siRNA，通常所说的就是artifical microRNA,采用的方法如下：
一方面看看你的knock down(or knock out)的基因expression profile（northern or qPCR,如果有antibody就更容易了），确定确实是这个基因发生了silencing
另一方面就是complement，用endogenous或者是35spromoter加上你的基因coding sequence，转入host里边，看看phenotype和wildtype是否一样，当然，一样是最理想的了，至少差不多，这就证明了确实是这个基因silencing引起的
还有就是microarray或者transcriptome测序了，看看这个基因是否引起其他基因的变化
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8楼2011-02-23 23:06:46
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信心92楼
2011-02-21 20:09   回复  
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