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白色雨花石

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于RNAi的一个问题

问题如下，请帮忙解答下：

RNA干涉（RNA interference, RNAi ）是一种快速、有效的研究基因功能的方法，但缺点是有时会导致非特异效应，即影响了其它基因的功能，因而产生非特异性的表型。若过表达基因A序列片段构建的RNAi导致了一定的表型，如何证明所观察到的表型是由于此RNAi特异性地影响了其靶基因的表达所引起？举出至少两种实验方法（其中一种为遗传学方法）验证你的解释。

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1楼 2011-02-21 19:56:33

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-23 13:06:15

表型拯救
RACE

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4楼2011-02-23 12:14:14

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白色雨花石

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 674298

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-23 12:14:14:
表型拯救
RACE

你好，可以帮忙给详细说下么？没做过这方面的东西，不太明白。谢谢了

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5楼2011-02-23 20:08:30

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-02-24 09:14:18
白色雨花石(金币+5): 谢谢了，用遗传学的方法怎么弄呢？ 2011-03-01 22:32:34

引用回帖:

Originally posted by 白色雨花石 at 2011-02-23 20:08:30:
你好，可以帮忙给详细说下么？没做过这方面的东西，不太明白。谢谢了

1、表型拯救：过表达干扰的靶基因，看是否对抗RNAi的效果
2、RACE：看目的靶位是不是被切割了

请查相关的文献

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6楼2011-02-23 21:10:40

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夏尔list

金虫 (著名写手)

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将潜在的序列和相应的基因组数据库（人，或者小鼠，大鼠等等）进行比较，排除那些和其他编码序列/EST 同源的序列。

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7楼2011-02-23 22:24:06

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sutao1979

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-02-24 09:14:26
白色雨花石(金币+15): 谢谢了。 2011-03-01 22:34:30

挺容易的啊，RNAi有两种方法一个是miRNA另一个是siRNA，通常所说的就是artifical microRNA,采用的方法如下：
一方面看看你的knock down(or knock out)的基因expression profile（northern or qPCR,如果有antibody就更容易了），确定确实是这个基因发生了silencing
另一方面就是complement，用endogenous或者是35spromoter加上你的基因coding sequence，转入host里边，看看phenotype和wildtype是否一样，当然，一样是最理想的了，至少差不多，这就证明了确实是这个基因silencing引起的
还有就是microarray或者transcriptome测序了，看看这个基因是否引起其他基因的变化

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8楼2011-02-23 23:06:46

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