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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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白色雨花石

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于RNAi的一个问题

问题如下,请帮忙解答下:

RNA干涉(RNA interference, RNAi )是一种快速、有效的研究基因功能的方法,但缺点是有时会导致非特异效应,即影响了其它基因的功能,因而产生非特异性的表型。若过表达基因A序列片段构建的RNAi导致了一定的表型,如何证明所观察到的表型是由于此RNAi特异性地影响了其靶基因的表达所引起?举出至少两种实验方法(其中一种为遗传学方法)验证你的解释。
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白色雨花石

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-23 12:14:14:
表型拯救
RACE

你好,可以帮忙给详细说下么?没做过这方面的东西,不太明白。谢谢了
5楼2011-02-23 20:08:30
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★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-02-24 09:14:18
白色雨花石(金币+5): 谢谢了,用遗传学的方法怎么弄呢? 2011-03-01 22:32:34
引用回帖:
Originally posted by 白色雨花石 at 2011-02-23 20:08:30:
你好,可以帮忙给详细说下么?没做过这方面的东西,不太明白。谢谢了

1、表型拯救:过表达干扰的靶基因,看是否对抗RNAi的效果
2、RACE:看目的靶位是不是被切割了

请查相关的文献
6楼2011-02-23 21:10:40
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夏尔list

金虫 (著名写手)


将潜在的序列和相应的基因组数据库(人,或者小鼠,大鼠等等)进行比较,排除那些和其他编码序列/EST 同源的序列。
7楼2011-02-23 22:24:06
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sutao1979

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-02-24 09:14:26
白色雨花石(金币+15): 谢谢了。 2011-03-01 22:34:30
挺容易的啊,RNAi有两种方法一个是miRNA另一个是siRNA,通常所说的就是artifical microRNA,采用的方法如下:
一方面看看你的knock down(or knock out)的基因expression profile(northern or qPCR,如果有antibody就更容易了),确定确实是这个基因发生了silencing
另一方面就是complement,用endogenous或者是35spromoter加上你的基因coding sequence,转入host里边,看看phenotype和wildtype是否一样,当然,一样是最理想的了,至少差不多,这就证明了确实是这个基因silencing引起的
还有就是microarray或者transcriptome测序了,看看这个基因是否引起其他基因的变化
8楼2011-02-23 23:06:46
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简单回复
信心92楼
2011-02-21 20:09   回复  
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