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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何对PCR测序产物进行分析？
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木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何对PCR测序产物进行分析？ 已有8人参与

最近在做某一基因的RT-PCR反应，取得了进展。产物送去测序，已将测序结果发给我了，但是我不知道如何从测序峰图中看出是否有突变?
我晓得最简单的办法就是对碱基序列进行对照，但是由于碱基数较多，，所以操作起来比较麻烦，不知道是否有较简单的方法？
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
1楼 2011-01-29 14:44:45
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丫头珠

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
9楼: Originally posted by guoxingjun2008 at 2011-02-10 09:42:48
1060bp比较长了，单向肯定是不准的，建议用双向拼接后会准确很多，同时用高保真酶，完了再加A反应，之后就可以连接T载体，这样测序既准确也能保证不会人为渗入突变碱基。  
    同时，如果和原序列比对不上的话 ...

我也是分子生物学实验的新手，我克基因的时候是把目的条带切胶回收，然后连接T载体24H后，连接入感受态DH-5阿尔法细胞，然后涂板，第二天挑菌，培养15H，菌落PCR，有结果了就送测序，但是楼上说的A反应是什么呢？如果我测得是正向的，比对出的结果不是目的基因，还需要反向互补吗？
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12楼2015-03-20 11:02:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): good 2011-01-30 18:59:24
用软件进行比对啊
经典的bioedit到什么dnaman之类的都可以
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2楼2011-01-29 17:58:17
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phoenix211

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+2): 谢谢交流 2011-01-30 19:00:33
用软件做就好了啊，我一般用DNAMAN和Clustal Raindy。非常方便。
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3楼2011-01-29 23:41:22
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
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dhd997(金币+3): good 2011-01-30 19:00:57
对头，但是不知道你是不是双向测序，如果是双向测序的话要用拼接软件拼接后再比对。
   另外我提醒一下你，不知道你PCR的时候用的普通Taq酶还是高保真Taq酶，如果是普通Taq酶的话，看突变是不科学的，因为普通Taq酶保真性不好，有渗入错误碱基的可能，所以最好是用Pfu！
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4楼2011-01-30 14:49:01
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