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木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】如何对PCR测序产物进行分析？已有8人参与

最近在做某一基因的RT-PCR反应，取得了进展。产物送去测序，已将测序结果发给我了，但是我不知道如何从测序峰图中看出是否有突变?
我晓得最简单的办法就是对碱基序列进行对照，但是由于碱基数较多，，所以操作起来比较麻烦，不知道是否有较简单的方法？

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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。

1楼 2011-01-29 14:44:45

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傻子

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 谢谢交流 2011-02-12 21:10:11

PCR 产物直接测序是会产生在序列前后各100bp左右的测序结果不准确，那部分结果基本是不可读的，所以，你要确定你所需序列的位置，如果是靠近两端，建议连入载体测序或者重新设计引物，使所需序列在PCR产物的中间部分测序。同时PCR产物使用双向测序以保证准确，不知你测序的目的，是否要查找突变点，如果是的话，在测序后的矫正过程中要注意套风的辨认，并且需要连入载体多次验证测序。
序列分析的话，推荐DNAstar lasergene中的SeqMan，这个软件可以直接读取测序峰图进行比较，在手工矫正测序图的时候很方便，突变点也可以通过软件功能显示。