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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因敲除试验
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由田120516

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因敲除试验

我最近在做基因敲除试验，看了很多的文献，有一个问题一直让我很困惑，希望大家帮我解惑，谢谢！
我的方法是首先扩增要敲除的基因的全序列，并将其连接在骨架质粒pUC18的多克隆位点中，然后要将抗生素抗性基因插入到该基因中间，使其失活，从而构建用于基因敲除的自杀质粒。我不明白的是该抗生素抗性基因需要自己的启动子吗，还是它可以利用质粒本身的启动子进行转录翻译？
我看过很多文献，在这一点上都未做详细说明。但经过分析（查看抗生素抗性基因的长度），好像不需要自己的启动子。
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1楼 2011-01-23 09:12:31
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wt3532

木虫 (著名写手)
我想问问楼主，puc18质粒插入目的基因（中间插入抗性基因）构建自杀质粒，这段基因能够和染色体DNA重组吗，楼主使用的是大肠杆菌还是别的细菌，是不是所有细菌都能用类似的方法敲除基因？
我以前看过的大肠杆菌基因敲除要用的三个质粒，不知道楼主基因敲除成功没有，敲除后怎样鉴定敲除成功。
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13楼2011-02-18 16:51:52
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