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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】异源表达的蛋白大小变大
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jyh024

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】异源表达的蛋白大小变大

我用的是pET-15b载体在BL21中表达的放线菌中的一个氧化还原酶，结果跑出电泳来总是发现蛋白比目的蛋白变大了，不知道怎么回事。换了载体也是这样的，而且测序显示DNA序列正确，求教各位大侠了。
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1楼2011-01-20 10:48:36
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-01-20 19:40:27
jyh024(金币+2): 谢谢指教！ 2011-01-21 09:11:46
如果有His-tag的话，SDS-PAGE显示分子量变大几KD是很正常的，有文章专门报道这种情况；另外蛋白的高级结构也影响SDS-PAGE上表观分子量的，至于楼上说的糖基化在大肠杆菌是不会发生的，可以排除。
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3楼2011-01-20 13:55:47
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biowandy

木虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2): 解释的很到位~~~鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-20 13:35:22
jyh024(金币+3): 感谢你的帮助！这个大小我是用软件做的。 2011-01-21 09:12:34
引用回帖:
Originally posted by jyh024 at 2011-01-20 10:48:36:
我用的是pET-15b载体在BL21中表达的放线菌中的一个氧化还原酶，结果跑出电泳来总是发现蛋白比目的蛋白变大了，不知道怎么回事。换了载体也是这样的，而且测序显示DNA序列正确，求教各位大侠了。

先看看载体是否 带有什么标签，或者说起始密码子在那个位置，是否有多表达的部分，

其次你要搞清楚你的目的蛋白大小是什么意思，是别人告诉你的大小，还是说你有标准品，很多时候在数据库查的分子量和真实的蛋白分子量是有差异的，这种差异有几个原因，第一就是page本身就不是精确的方法，收到一些因素影响，第二你的蛋白是否有糖基化，有些蛋白数据库只告诉你蛋白的大小，但是糖基化的大小他不会告诉你。
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2楼2011-01-20 11:41:42
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