应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒电泳，大家来看看
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2142  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒电泳，大家来看看 已有10人参与

BL21转入pET-28a表达载体，摇菌后，提质粒，电泳总是2-3条带，原本要用回收后的质粒酶切，提了好几次，都跑不出单一的条带来。 同时，我提取质粒后，直接酶切，电泳出来结果也是好几条带，无法回收（酶切位点只有一个，并且正确选择的酶—）  请高手指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
1楼 2011-01-15 16:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dream-fish at 2011-01-16 11:13:17:
先保证质粒是正确的，实验室有没有人成功过？其次，如果别人能成功，那考虑用他用过的酶做一次，验证你的质粒和酶是否正确。最后一招：换个公司的酶

实验室以前没有用这个质粒酶切过，这种质粒是今年刚买进来的，质粒大约5.4Kbp 酶切后出来一条大的带大概符合要求，但是底下还有一条1000bp左右的带，无法解释。分步酶切的SalI和EcoRI 分别1.5h和1h
赞一下 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
8楼2011-01-16 11:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-16 09:38:52
无图无真相啊  
质粒2-3条带正常  但是单酶切后如果不是一条带的话 就不正常了
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2011-01-15 17:10:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2011-01-15 17:10:52:
无图无真相啊  
质粒2-3条带正常  但是单酶切后如果不是一条带的话 就不正常了

我做的是双酶切分步酶切，Sal I 和EcoRI，分别是1.5小时和1小时，也是出来多条带，怎么回事啊，谢谢！
赞一下 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
3楼2011-01-15 17:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2011-01-16 09:38:35
引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2011-01-15 17:22:00:

我做的是双酶切分步酶切，Sal I 和EcoRI，分别是1.5小时和1小时，也是出来多条带，怎么回事啊，谢谢！

分析分析各条带的大小关系，是空载体还是有插入片段的?
再看看酶切体系和条件，EcoRI比较容易出star activity
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-01-15 22:47:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 083000学硕274求调剂 +8 Li李鱼 2026-03-26 8/400 2026-03-28 20:33 by 加油向未来啊
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 311（085601）求调剂 +4 liziyeyeye 2026-03-28 4/200 2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +3 AZMK 2026-03-27 5/250 2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 347求调剂 +3 山顶见α 2026-03-25 3/150 2026-03-28 14:13 by 唐沐儿
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭