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[交流]
【求助/交流】反转录时该选用oligo dT还是 随机6引物？
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| 不太明白什么时候选用oligo dT，什么时候选用随机引物, 求指点 |
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 分子生化实验经验积累 |
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9楼2013-03-31 22:15:12
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xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2011-01-09 08:57:44
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2011-01-09 08:57:44
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使用oligo dT引物扩增的产物, 可以保证扩增产物包括mRNA的3'末端(减少rRNA的干扰), 但是oligo dT primer扩增有一个问题, 就是扩增片段的长度和扩增产物所包含的信息量的问题, 之所以有长度这个问题,一方面和lz所提到的RNA完整性有关,但最重要的限制在于逆转录酶的延伸能力. 用oligo dT primer扩增可能出现扩增出来的片段长度短, 虽然都有mRNA的3'端, 但是序列信息多位于3'-UTR附近, 若扩增序列太短,则有用信息很少, 不利于序列的识别和分析. 使用random primer, 也有片段长度的限制, 但是由于它的逆转录并不一定在mRNA的末端起始, 而是在随机位置起始,所以它的扩增片段带有更多CDS的信息.但是如果是用总RNA逆转录的话,有可能会受到rRNA的干扰. 至于Gsp,只是在扩增已知gene/gene family以及部分原理的RACE中使用. |
2楼2011-01-08 23:07:42
3楼2011-01-08 23:58:48
4楼2011-01-17 21:26:13
