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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【交流】HPLC交流交流，呵呵，有问题集中讨论嘛
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885511

木虫 (著名写手)
★ ★
novus(金币+2): 很耐心的讲解，不愧是PhD兼DXY的老版主！欢迎常来药学版给新虫答疑解惑！ 2011-01-19 15:15:33
引用回帖:
Originally posted by huahua5 at 2011-01-10 17:13:52:



异丙醇因为粘度大，所以要小流速。我用0.1ml/min的流速走异丙醇，压力2.1MPa,走5个小时，应该可以吧？（柱子250*4.6mm，柱体积没算错的话应该是4ml多）。之后就可以直接走流动相了？还是需要走甲醇？

另 ...

氨基柱在含水量多的情况下是很不稳定的。也不宜在强酸的环境下使用。用的是缓冲液则先用水/乙腈清洗再用乙腈，.氨基住其本质属于正相柱，使用氨基柱除了采用正相系统作为流动相以外，一般还采用乙腈-水作为流动相，但是要求乙腈的含量不得低于80%，含水过多的流动相对氨基柱有损害，一般尽量不要用含水过多流动相。建议用小流速的异丙醇冲洗过夜试试。氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的，这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。NH2柱是在硅胶上键合一个5碳NH2;CN柱是在硅胶上键合一个5碳CN基;NH2.CN都为两相柱.
对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。
平时在正相条件下使用：
首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。
平时在反相条件下使用：
缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。
用50倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。
这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等
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11楼2011-01-10 20:19:30
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huahua5

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。

本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2769610&fpage=0&view=&highlight=&page=2

我用异丙醇冲洗了，现在正在用甲醇冲洗。
之后用异丙醇过渡回到流动相，这个过渡要冲洗都久呢？
为什么要用异丙醇过渡？直接用流动相不可吗？我以前做完样品，用甲醇冲洗30分钟，之后下次再做样品，直接走流动相？这样有问题吗？
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12楼2011-01-13 09:03:31
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xiaodu2007693

木虫 (著名写手)

药学版~龙猫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
买了半年多的制备液相，之前很好用
目前的问题是流速不稳，压力也是上下波动，经确认是管路没有气泡
请问是泵单向阀脏了吗？还是垫磨损了？
解决方法有那些？
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欢迎您来药学版~
13楼2011-01-13 09:29:39
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885511

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaodu2007693 at 2011-01-13 09:29:39:
买了半年多的制备液相，之前很好用
目前的问题是流速不稳，压力也是上下波动，经确认是管路没有气泡
请问是泵单向阀脏了吗？还是垫磨损了？
解决方法有那些？

制备液相还是请工程师来瞧瞧，这个只是用过，没拆过，呵呵，这个比较贵
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14楼2011-01-13 09:47:41
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wlsky

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请教，配制流动相是用纯化水还是蒸馏水，谢谢
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15楼2011-01-28 14:30:12
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885511

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wlsky at 2011-01-28 14:30:12:
请教，配制流动相是用纯化水还是蒸馏水，谢谢

用蒸馏水过滤一下，再超一下就可以用了，当然可以直接用MILQ的水了，呵呵，水要保持新鲜，当天去蒸馏水用
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16楼2011-01-28 16:32:13
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粉色玉米

木虫 (著名写手)

笨笨的乖傻傻~
学习了、、、
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下一站的幸福。。简单、单纯。
17楼2011-01-28 21:11:00
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885511

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 粉色玉米 at 2011-01-28 21:11:00:
学习了、、、

一起讨论讨论嘛，一起提高
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18楼2011-01-28 21:26:11
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粉色玉米

木虫 (著名写手)

笨笨的乖傻傻~
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 885511 at 2011-01-28 21:26:11:

一起讨论讨论嘛，一起提高

我刚接触、、、以后有问题过来讨教、、
我们一般用的安捷伦那个hplc 以后遇到问题来向前辈交流、、、
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下一站的幸福。。简单、单纯。
19楼2011-01-29 12:16:51
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maliyuan

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
20楼2011-01-29 15:56:31
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