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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】指导-pcr产物电泳后回收 已有11人参与

我将pcr产物电泳后有2500(目的带)和1000(浓度低)的两条条带,将目的带割胶回收后在进行电泳,还能发现还有1000的带出现,请问是什么原因?

[ Last edited by 1949stone on 2011-1-5 at 16:51 ]
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这事我测序验证过,有一条引物在产物内部有错配,可以看以下,3'有四个碱基一样就可能扩出来(很弱),要不回收,要不酶切,对下游实验没影响。
生命不息,探索不止。
12楼2011-01-05 22:28:54
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 16:50:49
又出“跪求”字眼了。
可能是Kit的原因,实验室有段时间也老出这个问题,回收后,要么出现一条较大的浅带,要么出现一条较小的浅带。不过不影响后续的实验。
可以将电泳时间延长,将条带分得比较开,避免切胶带来的影响。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-01-05 16:26:22
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)


1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 16:52:09
割胶是如果用的是高能紫外会不会导致dna连得某个位点断裂,从而导致这个结果?还有割胶的时候一般是用多少的紫外?
3楼2011-01-05 16:33:50
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

还有电泳图上两个条带距离还是挺远的,电泳了1小时
4楼2011-01-05 16:34:52
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