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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】指导-pcr产物电泳后回收
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】指导-pcr产物电泳后回收 已有11人参与

我将pcr产物电泳后有2500（目的带）和1000（浓度低）的两条条带，将目的带割胶回收后在进行电泳，还能发现还有1000的带出现，请问是什么原因？

[ Last edited by 1949stone on 2011-1-5 at 16:51 ]
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1楼 2011-01-05 16:10:09
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这事我测序验证过，有一条引物在产物内部有错配，可以看以下，3'有四个碱基一样就可能扩出来（很弱），要不回收，要不酶切，对下游实验没影响。
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生命不息，探索不止。
12楼2011-01-05 22:28:54
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 16:50:49
又出“跪求”字眼了。
可能是Kit的原因，实验室有段时间也老出这个问题，回收后，要么出现一条较大的浅带，要么出现一条较小的浅带。不过不影响后续的实验。
可以将电泳时间延长，将条带分得比较开，避免切胶带来的影响。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-01-05 16:26:22
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 16:52:09
割胶是如果用的是高能紫外会不会导致dna连得某个位点断裂，从而导致这个结果？还有割胶的时候一般是用多少的紫外？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-05 16:33:50
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
还有电泳图上两个条带距离还是挺远的，电泳了1小时
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4楼2011-01-05 16:34:52
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