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August893

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳胶的详细制备方法

SDS-PAGE凝胶电泳胶的详细制备方法
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henkally

禁虫 (著名写手)

August893(金币+1): 2011-03-30 15:13:30
本帖内容被屏蔽

3楼2010-12-29 11:32:06
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★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-29 17:35:12
August893(金币+1): 2011-03-30 15:13:26
,看看汪家政的 蛋白质技术手册吧,免费的。

http://ishare.iask.sina.com.cn/f/7521954.html
2楼2010-12-29 11:16:55
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guang012345

新虫 (初入文坛)


按步骤做就可以了啊
4楼2011-01-14 22:00:07
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3515

铜虫 (初入文坛)


★ ★ ★
rainwander(金币+3):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-15 22:07:56
个人觉得那本书有点儿老了,过时了
以下是我个人查资料得出的,也是自己做实验要用的。可以参考一下,不过我觉得你还是要多查文献,与你要做内容相关的文献,还是很有用的。


(1) 30%丙烯酰胺(Acr)溶液:称Acr 30g,甲叉双丙烯酰胺(Bis)0.8g,加纯水至100mL 4℃棕色瓶保存(1-2个月)
(2) 10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液:称SDS 10g,加纯水至100mL,室温保存
(3) 10%过硫酸铵(AP)溶液:称AP 1g,加纯水至10mL,-20℃保存
(4) 1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液:称取Tris 181.71g,加入800mL水,用1mol/L盐酸调pH8.8, 最后定容至1L
(5) 0.5mol/L pH6.8 Tris-HCl缓冲液:称取Tris12.1g,加入150mL水,用1mol/L盐酸调pH6.8, 最后用蒸馏水定容至200mL
(6) 1.0mol/L  pH6.8 Tris-HCl缓冲液:称取Tris12.1g,加入50mL水,用1mol/L盐酸调pH6.8, 最后用蒸馏水定容至100mL。
(7) TEMED:N,N,N',N'-四甲基乙二胺;
DTT:二硫苏糖醇(DTT和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近,但DTT价格略高一些。由于容易被空气氧化,因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命)
(8) 12%变性聚丙烯酰胺凝胶溶液:现用现配
试剂组成                100mL
30%丙烯酰胺(mL)                40
Tris-HCL 1.5M pH8.8(mL)                25
10% SDS(mL)                1
超纯水(mL)                33
TEMED(μL)                40
10%过硫酸铵(mL)                1
(9) 4%变性聚丙烯酰胺凝胶溶液:现用现配
试剂组成                5mL
30%丙烯酰胺(mL)                0.67
Tris-HCL 0.5M pH6.8(mL)                0.63
10% SDS(mL)                0.05
超纯水(mL)                3.6
TEMED(μL)                5
10%过硫酸铵(mL)                0.05
(10) 5*上样缓冲液:4℃保存
试剂组成                10mL
Tris-HCL 1.0M pH6.8(mL)                2.5
甘油(mL)                5
SDS(g)                1
超纯水(mL)               
溴酚蓝                痕量
(10)10*电极缓冲液:
试剂组成                1L
甘氨酸(g)                2.5
Tris(g)                5
SDS(g)                1
超纯水(mL)               
室温保存,使用时取100 mL,另加10 mL 10% SDS定容至1L,可重复用3-5次
5楼2011-01-15 19:08:41
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