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【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳胶的详细制备方法
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| SDS-PAGE凝胶电泳胶的详细制备方法 |
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rainwander(金币+3):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-15 22:07:56
rainwander(金币+3):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-15 22:07:56
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个人觉得那本书有点儿老了，过时了 以下是我个人查资料得出的，也是自己做实验要用的。可以参考一下，不过我觉得你还是要多查文献，与你要做内容相关的文献，还是很有用的。 (1) 30%丙烯酰胺（Acr）溶液：称Acr 30g，甲叉双丙烯酰胺（Bis）0.8g，加纯水至100mL 4℃棕色瓶保存（1-2个月） (2) 10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液：称SDS 10g，加纯水至100mL，室温保存 (3) 10%过硫酸铵(AP)溶液：称AP 1g，加纯水至10mL，-20℃保存 (4) 1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris 181.71g，加入800mL水，用1mol/L盐酸调pH8.8， 最后定容至1L (5) 0.5mol/L pH6.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris12.1g，加入150mL水，用1mol/L盐酸调pH6.8， 最后用蒸馏水定容至200mL (6) 1.0mol/L pH6.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris12.1g，加入50mL水，用1mol/L盐酸调pH6.8， 最后用蒸馏水定容至100mL。 (7) TEMED：N,N,N',N'-四甲基乙二胺； DTT：二硫苏糖醇（DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命） (8) 12%变性聚丙烯酰胺凝胶溶液：现用现配 试剂组成 100mL 30%丙烯酰胺（mL） 40 Tris-HCL 1.5M pH8.8（mL） 25 10% SDS（mL） 1 超纯水（mL） 33 TEMED（μL） 40 10%过硫酸铵（mL） 1 (9) 4%变性聚丙烯酰胺凝胶溶液：现用现配 试剂组成 5mL 30%丙烯酰胺（mL） 0.67 Tris-HCL 0.5M pH6.8（mL） 0.63 10% SDS（mL） 0.05 超纯水（mL） 3.6 TEMED（μL） 5 10%过硫酸铵（mL） 0.05 (10) 5*上样缓冲液：4℃保存 试剂组成 10mL Tris-HCL 1.0M pH6.8（mL） 2.5 甘油（mL） 5 SDS（g） 1 超纯水（mL） 溴酚蓝 痕量 (10)10*电极缓冲液： 试剂组成 1L 甘氨酸（g） 2.5 Tris（g） 5 SDS（g） 1 超纯水（mL） 室温保存，使用时取100 mL，另加10 mL 10% SDS定容至1L，可重复用3-5次 |
5楼2011-01-15 19:08:41
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