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August893

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳胶的详细制备方法

SDS-PAGE凝胶电泳胶的详细制备方法

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1楼 2010-12-29 11:11:34

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3515

铜虫 (初入文坛)

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★ ★ ★
rainwander(金币+3):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-15 22:07:56

个人觉得那本书有点儿老了，过时了
以下是我个人查资料得出的，也是自己做实验要用的。可以参考一下，不过我觉得你还是要多查文献，与你要做内容相关的文献，还是很有用的。

(1) 30%丙烯酰胺（Acr）溶液：称Acr 30g，甲叉双丙烯酰胺（Bis）0.8g，加纯水至100mL 4℃棕色瓶保存（1-2个月）
(2) 10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液：称SDS 10g，加纯水至100mL，室温保存
(3) 10%过硫酸铵(AP)溶液：称AP 1g，加纯水至10mL，-20℃保存
(4) 1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris 181.71g，加入800mL水，用1mol/L盐酸调pH8.8，最后定容至1L
(5) 0.5mol/L pH6.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris12.1g，加入150mL水，用1mol/L盐酸调pH6.8，最后用蒸馏水定容至200mL
(6) 1.0mol/L pH6.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris12.1g，加入50mL水，用1mol/L盐酸调pH6.8，最后用蒸馏水定容至100mL。
(7) TEMED：N,N,N',N'-四甲基乙二胺；
DTT：二硫苏糖醇（DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命）
(8) 12%变性聚丙烯酰胺凝胶溶液：现用现配
试剂组成 100mL
30%丙烯酰胺（mL） 40
Tris-HCL 1.5M pH8.8（mL） 25
10% SDS（mL） 1
超纯水（mL） 33
TEMED（μL） 40
10%过硫酸铵（mL） 1
(9) 4%变性聚丙烯酰胺凝胶溶液：现用现配
试剂组成 5mL
30%丙烯酰胺（mL） 0.67
Tris-HCL 0.5M pH6.8（mL） 0.63
10% SDS（mL） 0.05
超纯水（mL） 3.6
TEMED（μL） 5
10%过硫酸铵（mL） 0.05
(10) 5*上样缓冲液：4℃保存
试剂组成 10mL
Tris-HCL 1.0M pH6.8（mL） 2.5
甘油（mL） 5
SDS（g） 1
超纯水（mL）
溴酚蓝痕量
(10)10*电极缓冲液：
试剂组成 1L
甘氨酸（g） 2.5
Tris（g） 5
SDS（g） 1
超纯水（mL）
室温保存，使用时取100 mL，另加10 mL 10% SDS定容至1L，可重复用3-5次

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