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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】【求助】考马斯亮蓝测蛋白出现絮状沉淀
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liliinjn

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】【求助】考马斯亮蓝测蛋白出现絮状沉淀 已有8人参与

RT
用考马斯亮蓝测Tris-HCl 提取的植物组织中的蛋白含量 为什么加入考马斯亮蓝后会出现絮状沉淀  静置一段时间后明显蓝色的絮状沉淀沉积在下层
急啊、、、、
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1楼 2010-12-28 13:37:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhaoyu2881

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
碰到了同样的问题，想问楼主最后这个问题解决了么？……是什么原因造成的？
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Thatislife,onlylifehurts.
10楼2011-10-27 22:27:02
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普通回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-12-28 19:35:11
我记得做的时候放很长时间时才会出现沉淀，刚反应是不会有沉淀的，反应10 min后就可以测吸光值了。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-12-28 14:06:18
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-28 14:06:18:
我记得做的时候放很长时间时才会出现沉淀，刚反应是不会有沉淀的，反应10 min后就可以测吸光值了。

我刚加进去就开始有沉淀了  很明显的、、、、
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3楼2010-12-28 15:40:56
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-12-28 19:35:19
说明所提取的蛋白质疏水性比较强,可以使用上海生工的改良型Bradford蛋白定量试剂盒.
Modified Bradford Protein Assay Kit
改良型Bradford蛋白浓度测定试剂盒       
产品说明：在使用常规Bradford试剂进行蛋白定量时，考马斯亮兰G-250染料分子之间，以及G-250与蛋白质复合物之间会发生聚集，随着时间的延长，产生可见的易沉降的颗粒，使得在595nm处测定的吸光度值A595时，蛋白质浓度的定量偏低。针对此种情况，本试剂盒通过添加特殊的试剂，使得考马斯亮兰G-250染料分子之间，以及G-250与蛋白质复合物在30分钟内不容易发生沉降，从而提高了测量结果的准确性。使得大量样品的定量变的从容不迫。
产品特点：
1.在30分钟内，G-250染料分子和G-250与蛋白质复合物不容易发生沉淀；
2.无论是分光光度法或酶标板法都有大小两种定量范围的操作方法；
3.还能够适应疏水的膜或粘蛋白的定量；
4.比较合适于从容不迫地进行大量样品的定量；
5.与常规的Bradford法相比，线形关系更佳，保证了结果的准确性。
编号        包装        价格        产地
SK3041        1000 Assays        360        生工
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4楼2010-12-28 16:12:53
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caff

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
难道是你浓度配太大了,还是溶解考马斯亮蓝的时候醇太多了,有东西会醇沉?正常刚加进去不可能的哇
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5楼2010-12-28 16:33:22
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2010-12-28 16:12:53:
说明所提取的蛋白质疏水性比较强,可以使用上海生工的改良型Bradford蛋白定量试剂盒.
Modified Bradford Protein Assay Kit
改良型Bradford蛋白浓度测定试剂盒       
产品说明：在使用常规Bradford试剂进行蛋白定量时 ...

谢谢！但是看资料是亲水性的蛋白质 或许是提取液中其他成分的影响吧
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6楼2010-12-28 20:59:15
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by caff at 2010-12-28 16:33:22:
难道是你浓度配太大了,还是溶解考马斯亮蓝的时候醇太多了,有东西会醇沉?正常刚加进去不可能的哇

谢谢！考马斯亮蓝是按照标准配的 应该不会有错 浓度也做了梯度 还得继续找原因、、、
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7楼2010-12-28 21:00:46
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不同的蛋白会造成不同的效果的
减少你加入的蛋白或降低蛋白浓度
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8楼2010-12-29 11:52:26
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-12-29 11:52:26:
不同的蛋白会造成不同的效果的
减少你加入的蛋白或降低蛋白浓度

谢谢 都试过了 都稀释到跟空白一样的颜色了 还是能看到有小颗粒
怕是疏水蛋白或粘性蛋白还加了氢氧化钠 都没能改变、、、
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9楼2010-12-29 16:14:09
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