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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】【求助】考马斯亮蓝测蛋白出现絮状沉淀
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liliinjn

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】【求助】考马斯亮蓝测蛋白出现絮状沉淀 已有8人参与

RT
用考马斯亮蓝测Tris-HCl 提取的植物组织中的蛋白含量 为什么加入考马斯亮蓝后会出现絮状沉淀  静置一段时间后明显蓝色的絮状沉淀沉积在下层
急啊、、、、
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1楼 2010-12-28 13:37:28
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-28 14:06:18:
我记得做的时候放很长时间时才会出现沉淀，刚反应是不会有沉淀的，反应10 min后就可以测吸光值了。

我刚加进去就开始有沉淀了  很明显的、、、、
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3楼2010-12-28 15:40:56
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2010-12-28 16:12:53:
说明所提取的蛋白质疏水性比较强,可以使用上海生工的改良型Bradford蛋白定量试剂盒.
Modified Bradford Protein Assay Kit
改良型Bradford蛋白浓度测定试剂盒       
产品说明：在使用常规Bradford试剂进行蛋白定量时 ...

谢谢！但是看资料是亲水性的蛋白质 或许是提取液中其他成分的影响吧
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6楼2010-12-28 20:59:15
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by caff at 2010-12-28 16:33:22:
难道是你浓度配太大了,还是溶解考马斯亮蓝的时候醇太多了,有东西会醇沉?正常刚加进去不可能的哇

谢谢！考马斯亮蓝是按照标准配的 应该不会有错 浓度也做了梯度 还得继续找原因、、、
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7楼2010-12-28 21:00:46
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-12-29 11:52:26:
不同的蛋白会造成不同的效果的
减少你加入的蛋白或降低蛋白浓度

谢谢 都试过了 都稀释到跟空白一样的颜色了 还是能看到有小颗粒
怕是疏水蛋白或粘性蛋白还加了氢氧化钠 都没能改变、、、
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9楼2010-12-29 16:14:09
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liliinjn at 2010-12-29 16:14:09:
谢谢 都试过了 都稀释到跟空白一样的颜色了 还是能看到有小颗粒
怕是疏水蛋白或粘性蛋白还加了氢氧化钠 都没能改变、、、

没有呢 MM测的是一个什么样的蛋白溶液？ 我用的tris-HCl  不知道是不是样品中其他组分的影响
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11楼2011-11-01 13:23:08
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1963179楼: Originally posted by weihaie at 2012-04-24 10:18:59:
楼主的问题解决了么 我用ripa提蛋白的时候也出现了这个问题 不知道该怎么解决呢

分析是Tris的影响 换了其他溶液就没问题了  你看看你的蛋白溶液中是不是也存在什么会干扰的试剂
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13楼2012-04-24 13:51:37
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liliinjn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
1974095楼: Originally posted by 451839845 at 2012-07-25 14:30:49
我也遇到这个问题啊，不知道怎么回事，请问楼主是怎么解决的

我的可能是提取液里面的tris有影响 或者是提取出来的有部分果胶 和里面的乙醇反应了
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15楼2012-07-26 22:11:16
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