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janet0313

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】有关蛋白

为什么我做的蛋白在浓缩过程中会出现沉淀,怎样防止沉淀的生成?
我做的蛋白还要做其他实验,是不是要PH值在蛋白等电点以外就可以防止沉淀生成?
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janet0313

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-28 17:38:55:



。。。。。。起码也加一点盐吧,离子强度也太低了点,少说也加个50mM的NaCl啊。我建议你在Tris或者HEPES里加 100mMNaCl,这样来纯化你的蛋白。

另外要用软件预测一下你的蛋白的等电点,然后再选pH。

...

浓缩用的是 Amicon ultrafilitration cell equipped with a YM-10 cellulose membrane
9楼2010-12-29 13:31:58
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查看全部 13 个回答
janet0313(金币+1): 2010-12-28 17:09:17
janet0313(金币+1): 2010-12-28 17:13:34
将你的蛋白质的等电点,分子量大小及缓冲液组成成分列出来看看。
2楼2010-12-28 11:13:51
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laoshu16

银虫 (小有名气)


janet0313(金币+1): 2010-12-28 17:09:22
引用回帖:
Originally posted by janet0313 at 2010-12-28 10:57:53:
为什么我做的蛋白在浓缩过程中会出现沉淀,怎样防止沉淀的生成?
我做的蛋白还要做其他实验,是不是要PH值在蛋白等电点以外就可以防止沉淀生成?

高浓度的蛋白本来就很容易沉淀出来了吧
3楼2010-12-28 11:45:56
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janet0313

银虫 (小有名气)


等电点怎么测啊,我还不太清楚?
蛋白分子量25KDa,用的缓冲溶液时HEPES
该怎么办啊?
4楼2010-12-28 17:11:12
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